还原型谷胱甘肽治疗重症急性胰腺炎的实验研究.pdfVIP

山东医药2008年第48卷第47期 还原型谷胱甘肽治疗重症急性胰腺炎的 实验研究 潘 登，潘振龙，薛 媛 (运城市中心医院，山西运城04400o) [摘要] 将72只Wist盯大鼠随机分为三组 ，各24只。重症急性胰腺炎(sAP)组采用牛磺胆酸钠胆胰管逆行 注射的方法制作 sAP模型；GsH组为还原型谷胱甘肽 (GsH)治疗组，在模型制成前以肌注GsH；sO组为假手术组。 各组分别在造模后3、9、15h取胰腺、肺组织和静脉血。免疫组化法测定肺中IL-8、IL_6，比色法测定肺中髓过氧化 物酶(MP0)的活性及血清钙离子，RT—PcR检测肺中NF—KBp65mRNA，同时观察胰、肺组织病理变化。结果显示， 各时间点 sAP组肺组织中NF．KB、IL．6、IL-8、MP0水平升高，NF—KB、IL 、IL-8在9h达高峰，与 sO组相比，JP均 O．o5：GsH组IL-8、IL-6在各时间点均显著降低，NF—KB、MP0在9h最低 (P0．O5)；三组血清钙相比，P均O．05。 认为sAP时NF．KB促使 IL-8、IL_6活化，使炎症加剧 ；GsH能够抑制炎性因子的表达 ，对sAP有治疗作用。 [关键词] 胰腺炎；细胞因子；谷胱甘肽 [中图分类号] R576 [文献标识码] B [文章编号] 1oo2I266x(20o8)470·o27D2 重症急性胰腺炎(SAP)发病时，NF—KB活化，炎 视野(×400)，用 BI—2O0o图像分析系统进行定量 症因子大量释放，致组织损伤。患者常因并发呼吸 扫描，得到选定面积内的平均灰度值。比色法测定 窘迫综合征 (ARDs)…致多器官功能衰竭而死亡。 MPO活性。制备5％冰冻肺组织匀浆，离心后取上 SAP早期IL-l5、IL 髓过氧化物酶(MPO)活性增加， 清，在46Orun光波下进行扫描记录吸光度值，计算 血钙水平降低。还原型谷胱甘肽 (GsH)可以改善 MPO活力。以每克湿组织片在37c=【的反应体系中 预后，降低病死率 J。20o8年 1月一20o8年6月， H：O：被分解 1 mol为 1个酶活力单位 (u／g)。 我们通过动物实验观察了GsH对SAP的治疗作用 RT—PcR检测NF—KBp65的mRNA。用 zol提取肺 及机制。现报告如下。 组织总 RNA，逆转录与扩增用一步法完成，产物4 1 材料与方法 ℃保存，琼脂糖电泳、摄像，Gene‰ ls软件分析并 1．1 实验动物及主要试剂 健康 wistar大 鼠72 计算 目标片段与内参的比值。 只，体质量2oo一25Og。牛磺胆酸钠，注射用 CsH， 1．4 血清钙离子的测定 静脉血静置2h，以3O00 IL-l5、IL一8一抗及免疫组化试剂盒。禽类成髓细胞 r／min离心取血清，比色法在610nm处读血清吸光 性 白血病病毒反转录酶 (AMV)一步法 RT—PCR试 度值，计算钙离子浓度 (mm0l／，L)。 剂盒、引物，MPO，血清钙离子比色法试剂盒。 1．5 胰腺、肺组织病理学检查 胰腺、肺组织用 甲 1．2 动物模型的制备与标本收集 72只大鼠随机 醛固定，常规包埋、切片，HE染色，光镜观察。 分为三组，各24只。SAP组大鼠用戊巴比妥钠腹腔 1．6 统计学方法 采用sPssl0．O统计软件。数据 注射麻醉，正中切 口人腹，胆管人肝处用小动脉夹夹 比较用单因素方差分析。P≤0．05为差异有统计学 闭胆管。在十二指肠降部，用针头穿刺进入胆胰管， 意义 。 6min内缓慢、匀速注入牛磺胆酸钠，放开动脉夹， 2 结果 关腹。GSH组于模型制成前 1h肌注GsH(0．20g／ 2．1 组织病理学观察 肉眼观察：SO组各时间点 kg)。SO组(假手术组)仅行胆胰管穿刺。每组分 胰腺、肺无明显异常。SAP组造模 3h可见胰腺肿 别于造模后 3、9、15h取肺组织用于 NF．KB、IL-I5、 大、充血；9h加重并有散在出血点；l5h表面有凝 IL．8、MPO检测，下腔静脉取血检测钙离子，同时取