序列测定方法在ABO血型定型中的建立.pdfVIP

北京医学 2008年第 3O卷第 12期 ． 临床输血专栏 ． 序列测定方法在ABO血型定型中的建立 刘长利 龚晓燕 王卓妍 任芙蓉 吕秋霜 苗天红 摘【要】 目的 通过序列测定方法对ABO血型进行深入研究。方法 采用ABO基因的克隆序列测定方法对临 床疑难标本进行分析研究。结果 建立了稳定的ABO基 因克隆测序方法并应用于疑难标本鉴定。结论 该诊断方 法不仅成为ABO血型确诊的可靠保障，而且为 ABO变异型分子基础的深入研究提供 了重要依据和技术支持。 关【键词】 ABO血型 序列测定 建立 EstablishmentofDNA sequencingmethodontheidentificationofABO bloodgroup L／UChang一圮 GONGXiao—yan，WANGZhuo—yan，eta1． (BeijingRedCrossBloodCenter，Beijing100088) A【bstract】Objective ToestablishDNAsequencingmethodfortheidentificationofABObloodgroup．Methods Complicated samplesofblood group were analyzed by DNA cloning and sequencingtechnique．Results The DNA sequencingmethodwasestablishedandprovedtobestablethroughitsapplicationontheanalysisofcomplicatedsamples． Conclusions TheDNA cloningandsequencingmethodprovidesareliableguaranteeonABO genotypingandtechnical supportforfurtherstudyonmoleculargeneticsofcomplicatedbloodgroup． K【eywords】ABOtyping DNAcloningandsequencingmethod Establishment ABO血型基因分型技术实现了对 ABO基 因组 感受态E．coliDH一5 购 自博大泰克生物技术公 成 的部分分型工作…．但仅限于对该基 因中几个关 司；IPTG、X—Gal购 自Promega公司；pGEM—TVector 键位置的分析．而不能识别其他位点突变情况 当发 购 自Promega公司 f图 1)；DNA纯化 回收试剂盒 生血清学结果和基 因分型结果不一致而导致血型判 v3．0购 自道普生物技术有 限公司：BamHI：BioLabs 定困难时，需通过克隆测序技术 (DNAcloningand ⑧(NEB)公司；质粒小量提取试剂盒 ：TaKaRa公司。 sequenceanalysis1证实突变的发生 ，进而对某些血清 学特征做 出解释 。在 ABO系统变异型的研究中． DNA序列分析技术能够提高对其分子基础和基 因 多态性的认识 我们针对ABO基因主要外显子编码 序列进行高保真扩增后 ．产物进行克隆测序 ．从而建 立起稳定的ABO基因序列测定诊断方法 ．并且将该 方法应用于 ABO疑难标本的研究工作 中．报告如 下 材料与方法 图1 所使用的pGEM—T载体模式 图 一 、 标本及试剂 二 、方法 检测标本中．1例正定型红细胞与抗Al试剂不 1．引物合成 ：引物，1：5-CGGGATCCATGT