3,3-二甲基联苯胺法测定香菇漆酶活性研究.pdfVIP

第35卷第5期 江 苏 林 业 科 技 Vo1．35No．5 2008年 10月 Journnf j ngsuForestryscnce＆Technolo 0ct．2O0 8 文章编号：1001—7380(2008)05—0012—05 3，3’．二甲基联苯胺法测定香菇漆酶活性研究 王 鼎，曾东方 ，池汝安，王存文，吴元欣 (武汉工程大学化工与制药学院，湖北 武汉 430074) 摘要：以邻联甲苯胺 (3，3’一二甲基联苯胺)为底物，采用分光光度法测定香菇(n￡n“edod )漆酶(Laccase)的活 性，对最佳反应条件进行了筛选和优化。结果表明：当以醋酸一醋酸钠为缓冲溶液体系进行酶活性测定时，最适 pH 值为4，最适温度为53℃。漆酶在 30℃的条件下保温过夜活性仍能保持在90％以上，而高温条件下漆酶不稳定， 容易变性失活。当缓冲溶液体系中二价铜离子质量浓度在 5O～60m昏／L之间时，漆酶活性约提高50％；而亚铁离 子则可以完全抑制漆酶的活性。 关键词：香菇漆酶 ；缓冲溶液；金属离子 中图分类号：TQ91；Q939．97 文献标识码：A Determinati0n 0fLaccaseactivitvfrl0m L 比 面 by3，3’-dimethyIbellzidjne WANG Ding，ZENG D0ng—fang ，CHIRu—an，WANG Cun—wen，WU Yuan—xin (Scho0lofChemicalEngineeringandPhamacy，WuhanInstitute0fTechn0l0gy，wuhan43oo74，China) Abstract：SpectrophotometricdeterminationwastakentoevaluatetheactiVityofLaccasefom 凡￡n“f0e如desbyusingthe 0一t0lidine(3，3一dimethylbenzidine)assubstI_ate，andt0detern1inetheoptimalpHvaluesinvarieskindofconditions．Itis concludedthatintheaceticacid—s0dium acetatebuf_fersoluti0npH va1ue4wastheoptimalf0rtheenzymeassay．53℃ of temperaturewasf(】undt0betheoptimalundersuchacondition．9O％‘ofLaccaseactivitycouldbepresenred0Vemightby keepingtemperatureat30cc butitsthermalstabi1itywasunstable0nhightemperatureandLaccasecouldeasi1ybedeaci【— vated．TheLaccaseactivitywasenhancedbyab0ut50％ whenthebivalentc0pperionconcentrati0nwasbetween50and60 mg／LandfeITousioncouldentireIyinhibittheactivityofLaccase． Keyw0rds：Len￡nuf0ed0desLaccase；Buffersolution；Metalions 漆酶(Laccase)是一种含铜的蛋白质，其活性中 而且已有实验证明香菇可产生活性很高的真菌 心包括4个3种不同的铜离子，通过 4个铜离子协 漆酶 。 同传递电子和价态变化来实现对酚及其衍生物、芳 测定漆酶活性的方法许多，如极谱法、氧吸收 胺、羧酸及其衍生物等物质的催化氧化，其中包括对 法、高压液相色谱法和脉冲激光光声光谱法等