HPLC法测定杯苋甾酮血药浓度.doc

HPLC法测定杯苋甾酮血药浓度【摘要】 目的 建立反相高效液相色谱法测定杯苋甾酮在家兔血浆中的药物浓度。方法 血浆样品用乙腈提取,流动相为乙腈20 g、水80 g、磷酸二氢钠1.20 g,流速1 mL/min,检测波长243 nm。结果 家兔口服给药后血浆中可检出杯苋甾酮,杯苋甾酮在0.565～9.040 μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 0(n=5),日内RSD为±3.9%,日间RSD为±7.3%;血浆最低检测浓度为0.28 μg/mL。结论 本法快速、准确、重现性好,为该药物的药代动力学研究提供依据。 【关键词】 川牛膝;杯苋甾酮;HPLC;血药浓度 【Abstract】 Objective To establish a RP-HPLC(reversed-phase high-performance liquid chromatography) method for the determination of cyasterone in rabbit plasma.Methods The plasma samples were extracted with Methyl Cyanides.RP-HPLC conditions were set as follows:Mobile phase:CH3CN 20 g、H2O 80 g、NaH2PO4 1.20 g;Flow rate:1 mL/min,Detection wave length:243 nm.Results Cyasterone was found in rabbit plasma after oral drug administration.The calibration curve of cyasterone showed good linearity over the range of 0.565～9.040 μg/mL,r=0.999 0(n=5).RSD were ±3.9% and ±7.3%within-day and between-day respectively.The lowest detectable concentration was 0.28 μg/mL.Conclusion The method is rapid,accurate and reproducible,which can provide bases for the study of its pharmacokinetics. 【Key words】 Cyathula officinalis Kuan;Cyasterone;HPLC;Plasma drug concentration 川牛膝为苋科植物川牛膝(Cyathula officinalis Kuan)的干燥根,主产于四川、云南、贵州等地,具有逐瘀通经,通利关节,利尿通淋之功,用于胞衣不下、关节痹痛等[1]。其所含化合物类型主要有脂肪酸类、甾酮类、异黄酮类、齐墩果酸皂苷类化合物。根据近年来的文献报道,蜕皮甾酮有促进蛋白质同化作用、抗血小板聚集、降低血糖等明显的生理活性[2-3],与川牛膝补肝益肾、强筋健骨功效相符。杯苋甾酮(Cyasterone)(图1)[4-5]在川牛膝中含量较大[6],可作为代表性药物进行药物代谢动力学研究。因此本文建立高效液相色谱法测定杯苋甾酮的血药浓度为其进一步研究提供依据。 1材料、仪器和动物 实验动物:大耳兔,体重2.0 kg,由湖州市药检所提供。实验前禁食24 h,自由饮水,室温饲养。仪器:Waters高效液相色谱仪(515泵、2487紫外检测器),7725 i手动进样阀,针筒式微孔过滤器(0.45 μm,天津市腾达过滤器厂),GR-202 AND分析天平,UV-754型紫外可见分光光度计,80-2台式离心机,XW-80 A涡流混旋器,BDS 160电热恒温水温箱。杭州英谱工作站,AS 3120 A超声仪。药品和试剂:对照品,自制, TLC及HPLC检测均为单峰。经过UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、CD等测试鉴定为杯苋甾酮,纯度为99.6%(HPLC-ELSD归一化法测定)。乙腈、甲醇为色谱纯;实验用水为重蒸去离子水。 2方法 2.1给药采用灌胃法[7]给药,家兔称重2.0 kg,按家兔体重25 mg/kg给药。精密称取杯苋甾酮对照品50.0 mg,溶于10 mL蒸馏水中,超声成混悬液,吸于注射器中给药。用5 mL蒸馏水清洗注射器。给药前取血做空白血,给药后不同时间取血,HPLC法测定兔血浆中杯苋甾酮的含量。 2.2血样处理取兔耳缘静脉血,每次0.5 mL置于2 mL的真空采血管中(内含枸椽酸钠),加入乙腈