HPLC法测定止咳丸中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱含量.doc

HPLC法测定止咳丸中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱含量摘 要：目的：建立HPLC法测定止咳丸中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（5：95）为流动相；检测波长为205 nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。结果：盐酸麻黄碱在0.018 4～2.760 0 μg（r=0.999 93）；盐酸伪麻黄碱在0.026 4～3.168 μg（r=0.999 98）之间范围内呈良好线性关系。样品中盐酸麻黄碱平均回收率为97.88%，RSD= 2.08%；盐酸伪麻黄碱平均回收率为97.86%，RSD= 2.01%。结论：该法操作简便，结果准确，重现性好，可用于控制止咳丸的质量。 关键词：止咳丸；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；HPLC 中图分类号：R282.5 文献标识码：A 文章编号：1007-2349（2011）06-0078-02 止咳丸是云南省的传统中成药品种，由云南名中医翟玉六先生创制于清光绪33年（1908年），翟玉六大药房独家经销，由于疗效卓著，旧时已创下名牌，成为云南家喻户晓的常备治咳良药。收载于《卫生部药品标准》（中药成方制剂第十一册）［2］，标准编号为WS3-B-2096-96。因麻黄为本品处方中的君药，且根据止咳丸标准提高课题任务书及国家药典会的“立项综合意见单”的专家意见，选取麻黄中的主要成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱作为含量测定指标。 1 仪器与试药 岛津 1100系列高效液相色谱仪（包括真空脱气泵，四元泵，自动进样器，DAD检测器）；止咳丸（由昆明中药厂有限公司提供，批号：100319、100439、100501）；盐酸麻黄碱对照品（171241-200404）、盐酸伪麻黄碱对照品（171237-200505），均由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 2 实验方法及结果 2.1 对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，分别加0.1 moL/L盐酸溶液制成每1 mL各含10 μg的溶液，作为对照品溶液。 2.2 供试品溶液的制备 取止咳丸适量，除去糖衣，研细，取细粉约4 g，精密称定，置500 mL的锥形瓶中，加氯化钠7.5 g，再加入消泡剂1 g，加5 moL/L氢氧化钠溶液70 mL，摇散，超声处理30 min，再摇散，加水60 mL，蒸馏，用预先盛有0.5 moL/L盐酸溶液5 mL的100 mL量瓶收集蒸馏液近90 mL，加水至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。 2.3 检测波长的确定 取盐酸麻黄碱对照品溶液（23 μg/mL）及盐酸伪麻黄碱溶液（1.32 μg/mL），分别在紫外可见分光光度仪上进行盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的紫外光谱扫描，得到盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的紫外吸收光谱，可见盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在205 nm处有最大吸收，故选择205 nm作为盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的检测波长。盐酸麻黄碱紫外吸收光谱和盐酸伪麻黄碱紫外吸收光谱见图1、2。 2.4 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（5：95）为流动相；检测波长为205 nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。取对照品溶液和供试品溶液各20 μL注入液相色谱仪进行测定［1］。色谱图见图3和图4。 结果表明：供试品盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱与前后锋的分离度、拖尾因子均能满足《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法项下规定，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算均大于3000。 2.5 阴性对照实验 取处方中除麻黄外的其他药味，按处方剂量及制法和工艺要求制备缺麻黄阴性对照样品制成阴性对照溶液，用与样品相同的色谱条件测定。色谱图见图5。结果表明空白样品的色谱图中在与对照品相同保留时间（±5%）位置上没有吸收峰，说明该制剂中除麻黄外的其他药味和辅料对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定没有干扰。 2.6 线性与范围 精密取盐酸麻黄碱对照品溶液分别稀释成0.92、4.14、6.9、12.5、23.0、46.0、69.0、92.0、138 μg/mL的对照品溶液，精密吸取上述溶液各20 μL，分别进样，以对照品量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2 362.269 10X-13.540 62（r=0.999 93），结果表明，盐酸麻黄碱在0.018 4～2.760 0 μg之间呈良好线性关系。 精密取盐酸伪麻黄碱对照品溶液分别稀释成1.32、7.92、13.2、26.4、52.8、79.2、105.6、158.4 μg/mL的对照品溶液，精密吸取