慢性肝损伤家兔胆石症模型制作及成石因素探究.doc

慢性肝损伤家兔胆石症模型制作及成石因素探究[摘要]目的：建立四氯化碳(CCl4)所致慢性肝损伤、肝硬化大耳白兔模型，在此基础上研究CCl4所致慢性肝损伤的胆囊结石情况，探讨慢性肝损伤家兔胆囊结石形成的机制，从而论证采用慢性肝损伤家兔建立胆石症模型的可行性。方法：将50只家兔随机分成正常组、高胆固醇膳食组、慢性肝损伤组、肝硬化组、肝损伤后胆固醇组。观察家兔的胆石形成情况，透射电镜观察肝细胞超微结构，抽取胆汁细菌培养，酶比色法检测胆囊胆汁中胆汁酸、胆固醇的含量。结果：正常组无一例成石，高胆固醇膳食组8/8成石，慢性肝损伤组5/8成石，肝硬化组6/7成石，肝损伤胆固醇组6/8成石。慢性肝损伤组、肝硬化组、高胆固醇膳食组、肝损伤胆固醇组4组中肝脏超微结构均发生不同程度异常改变，以肝细胞水肿变性、核膜呈锯齿状、粗面内质网增多、线粒体肿胀为多见，肝硬化家兔组可见肝细胞凋亡坏死，高胆固醇膳食组可见胞质中大量脂滴。各组细菌培养均未发现细菌生长。慢性肝损伤组、肝硬化组胆囊胆汁中胆汁酸、胆固醇的含量均较正常组降低。结论：皮下注射CCl4致家兔肝损伤，进而诱导胆囊结石的造模方法可靠。形成的结石为混合性结石。慢性肝病所致肝细胞超微结构异常引起胆汁成分的改变，是肝病患者易发生胆石症的主要原因。慢性肝损伤、肝硬化与胆石症的发生有密切关系，且随着肝脏病变的加重，成石率升高。细菌感染可能不是慢性肝损伤胆囊结石的独立致石因素。 [关键词]慢性肝损伤；胆石症；肝细胞超微结构；动物模型 [中图分类号]R575　[文献标识码]A　[文章编号]1673-7210(2007)12(a)-106-04 近年，肝硬化后所引起的胆囊结石再次受到国内外学者的普遍关注。关于肝硬化合并胆囊结石的报道屡见不鲜，通过尸检、B超检查和临床资料回顾，国内肝硬化合并胆囊结石发病率为15.1％～59.0％，其发病率至少为非肝硬化病人的两倍。有学者认为胆囊结石病伴随的肝脏损害，很可能是胆囊结石的成因，而不是后果，也许它先于胆囊结石而存在。而胆囊结石病的反复发作，反过来加重原发性肝损害。现对四氯化碳(CCl4)诱导的慢性肝损伤兔模型进行研究，报道如下： 1　材料与方法 1．1　实验动物分组与处理 健康成年大耳白兔50只，体重2.5～3.0 kg，雌雄不拘，由广西中医学院实验中心提供。购入后适应性喂养1周，后随机分为5组，即正常组10只，终未存活10只，投以普通饲料10周，并予皮下注射生理盐水(2ml/kg，每4天1次，连续10周)。高胆固醇膳食组10只，终末存活8只，投以高胆固醇饲料(含1.8％胆固醇，胆固醇购于上海同药集团)lO周。慢性肝损伤组10只，终末存活8只，投以普通饲料，将CCl4(购于上海国药集团)与花生油以1:2.5比例混合，制成40％CCl4溶液，家兔称重后以2ml/kg体重，颈后皮下注射CCl4溶液，每4天1次，以形成皮下丘状突起为宜，连续10周，以肝脏病理检查纤维组织增生，肝细胞水肿、局部气球样变，但未形成假小叶为造模成功。肝硬化组10只，终末存活7只，投以普通饲料并予皮下注射CCl4(2ml/kg，每4天1次，连续20周)，以肝脏病理检查假小叶形成为造模成功。肝损伤胆固醇组10只，终末存活8只，在慢性肝损伤的基础上投以高胆固醇饲料10周。 1．2　实验项目 动物禁食(不禁水)24h。20％氨基甲酸乙酯(1g/kg)耳缘静脉注射麻醉，碘伏消毒后开腹，结扎胆囊颈部后摘除胆囊，先肉眼观察成石情况，并用注射器抽取全部胆汁至无菌试管，以日本东芝120自动生化分析仪对胆汁进行胆固醇、胆汁酸分析；部分胆汁进行细菌培养。于肝脏表面滴电镜固定液后切取约1mm3，放人4℃预冷的电镜固定液中保存，日立H～500透射电镜观察粗、滑面内质网，高尔基复合体，核糖体，线粒体等。另切取1cm3的肝组织于4％福尔马林液中，经常规脱水，石蜡包埋，切5tμm厚切片，常规苏木精伊红染色，光镜下观察。 1．3　统计学方法 采用SPSS 14.0进行统计学处理。 2　结果 2．1　各组动物胆囊结石情况 经鉴定，高胆固醇膳食组形成胆固醇结石，其他3组形成以胆红素为主的混合性结石(表1)。 　 2．2　各组动物胆囊胆汁胆固醇、胆汁酸水平见表2。 　　 2．3　肝脏病理结构及超微结构 高胆固醇膳食组见肝细胞排列紊乱，肝细胞浊肿，局部发生脂肪变，并可见小胆管瘀胆、棕黄色，汇管区胆管增生、瘀胆、结蒂组织增生、汇管区见有炎性细胞浸润，慢性肝损伤组见纤维组织增生，肝细胞水肿、局部气球样变、胆管增生、少许淋巴细胞浸润，汇管纤维间隔稍增宽。肝硬化组见假小叶形成，小叶内中央静脉缺如，细胞排列紊乱，多数细胞水肿，局部气球样变，小胆管增