环孢霉素A在兔眼滤过术中抗增殖作用的实验研究.doc

　　环孢霉素A在兔眼滤过术中抗增殖作用的实验研究 【关键词】 环孢霉素A 滤过手术 眼 兔 　　Abstract: Objective To study the antiproliferative effects of cyclosporine A in filtering operation. Methods 20 Chinese ly al sodium group, and undery. During the operation, 2％ CsA and NS inutes, and then 100mL balanced salt solution ined icroscope, electronic microscope, and the proliferating cell nuclear antigen(PA)ore functional filtering blebs plicaton a AG SL/kg耳缘静脉注射麻醉，术前10min双眼各滴0.4％盐酸奥布卡因表面麻醉3次。以角巩缘为基底做8mm×6mm结膜瓣，双眼分别用浸2％CsA、生理盐水的海绵片(4mm×3mm×2mm)置于巩膜面上5min，用20mL生理盐水冲洗，制作4mm×4mm板层巩膜瓣，切除1mm×3mm小梁组织，根切虹膜，10-0尼龙线缝合巩膜瓣2针，分层缝合Tenons囊和球结膜瓣致密闭。术后双眼滴用0.1％滴塞米松眼液、0.25％氯霉素眼液，每天4次，共1周。术后每天观察滤过泡、结膜、角膜、前房情况，术后1周、2周、1个月测眼压、观察眼底，在术后1周、2周、1个月分别用空气栓塞法处死动物5、5、10只，立刻取滤过泡及其附近组织，一分为二，一半用10％中性甲醛固定，石蜡包埋，制作病理切片，分别予HE染色、增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PA)染色，并行光镜检测；另一半用2.5％的戊二醛固定，行电镜观察。 　　1.4 统计学方法 　　采用SPSS 10.0统计软件，应用卡方检验、t检验和秩和检验对实验数据进行统计学处理。 　　2 结果 　　2.1 各组白兔术前、术后眼压(表1) 表1 实验组与对照组眼压比较(略) 　　经t检验，各组白兔术前、术后第1天眼压差异无统计学意义(P＞0.05)；术后第7、14、30天CsA组眼压较对照组下降明显，差异均有统计学意义(P＜0.05)。 　　2.2 各组白兔术后滤过泡形态(表2) 表2 实验组与对照组滤过泡形态比较（略） 　　滤过泡依照Krofeld分型法分为4型：Ⅰ型微小囊泡型、Ⅱ型扁平弥散型、Ⅲ型瘢痕型、Ⅳ型包囊型。Ⅰ、Ⅱ型为功能滤过泡，Ⅲ、Ⅳ型为非功能滤过泡；虽然经χ2检验两组间差异无统计学意义(P＞0.05)，但是实验组在各个时期功能性滤过泡比例明显增高,且泡壁薄，血管少。 术后1周生理盐水组见较多淋巴细胞、单核细胞、浆细胞浸润，大量新生毛细血管；CsA组炎性细胞和毛细血管均较少。术后2周，生理盐水组炎症细胞和毛细血管渐减少，出现成纤维细胞和少量增生纤维组织；CsA组炎性细胞更少，偶见成纤维细胞。术后第30天，生理盐水组见大量致密纤维组织，CsA组仅见少量稀疏纤维组织。 　　2.4 术后不同时期滤过区组织电镜检查结果 生理盐水组术后7d，见多量圆形核细胞，胞质空化，内质网肿胀，少量成纤维细胞；术后14d，见多量成纤维细胞，胞核增大，核仁染色深，核膜突起多，内质网肿胀明显，胞浆受压，质少，间质内胶原量多，紊乱；术后30d，见大量成纤维细胞，核染色变浅，核膜突起减少，内质网肿胀减轻，胞浆增多，空化少，间质纤维致密。CsA组：术后7d见少量炎性细胞，细胞浆内空泡，内质网肿胀；术后14d，少量成纤维细胞，核仁染色略深，核膜突起少，内质网轻度肿胀；术后30d，成纤维细胞略增多，核仁规则，间质少量胶原纤维，排列整齐(图2～4，见封4)。 　　2.6 并发症 CsA组有3例出现角膜上皮点状剥脱，自行愈合，未见浅前房及视网膜损害；生理盐水组有1例上皮点状损害，自愈。 　　3 讨论 小梁切除术是 治疗 青光眼的主要手术方法，术后滤过口开放、滤过道通畅，是房水外流、手术成功的保证［1］。但由于手术后成纤维细胞的增殖和移行，阻塞滤过通道，常造成手术失败。PA，又称周期素，是一种仅在增殖周期中合成和表达的核内多肽链，可以作为评价细胞增殖状态的指标之一。CsA是一种新型免疫抑制剂，广泛用于器官移植及免疫有关的疾病，近年来研究发现CsA还具有抗增殖作用，在适当浓度能有效抑制血管内皮细胞、成纤维细胞、表皮角质细胞、结膜成纤维细胞、晶状体上皮细胞的增殖［2-3］。关于CsA抗增殖作用的确切机制尚未完全阐明,可能通过以下途径作用于瘢痕形成的各个环节［4］