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截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定.pdf

第 41卷第 6期第 697页 华 中科技大学学报 (医学版) VoI.41 No.6 P.697 2012年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec. 2012 截短人胱硫醚 l3一合成酶的可溶性表达、 纯化及活性鉴定* 王利群 , 顾雅平 , 曹利民 , 汪 庆 , 于海燕。, 奚学志 , 孙培培 , 沈关心。△ 常州大学制药与生命科学学院,常州 213164 常州二十一世纪生物技术研究所有限公司,常州 213164 。华 中科技大学 同济医学院基础医学院免疫学系,武汉 430030 摘要 :目的 构建截短人胱硫醚 8一合成酶(T-hCBS)基 因原核表达载体 ,得到可溶性的T—hCBS蛋 白,为 同型半胱氨 酸检测试剂盒 的开发打下基础。方法 通过优化 T—hCBS基 因,克隆并构建重组表达质粒 pET15b/T—hCBS,转化大肠 埃希菌BI21。使用Ni亲和层析柱对重组蛋 白进行纯化,再通过 HiTrap脱盐柱脱盐 ,采用比色法检测 目的蛋 白活性。 结果 重组蛋 白在大肠埃希菌中可以高效表达 ,产量为 44mg/L,比活约 1100U/mg。15 SDS显示其相对分 子质量为45kD,与预计大小一致。表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋 白溶液均呈现红色。结论 成功克隆和表达 了ThCBS蛋 白,并得到高产高酶活性的可溶性蛋 白,对 同型半胱氨酸检测试剂盒 的开发有一定的潜在应用价值 。 关键词 :胱硫醚 合成酶 ; 重组 ; 可溶性蛋 白; 表达 中图分类号 :R345.5 DOI:10.3870/i.issn.1672—0741.2012.06.013 Expression,PurificationandCharacterization ofTruncatedHuman CystathionineI$-synthase W angLiqun ,GuYaping ,CaoLimin ,etal lSchool( PharmaceuticalEngineering Li{eScience,ChangzhouUniversity,Changzhou213164,China 。Changzhou21stCenturyBiotechResearch Institute,Changzhou213164,China Abstract Objeetive Toconstructthetruncatedhumancystathionine8一synthase(T—hCBS)expressvector,andobtainthe solublerecombinantproteinT-hCBS.Methods TheT hCBSgenewasclonedintopET15bvectortoconstructtherecombinant plasmidpET15b/T—hCBSwhichwasthentransformedintoE.coliBL21cellsforexpression.Theexpressedproteinwaspurified bymetal(Ni )chelatingaffinitychromatographyanddesaltedbyHiTrapdesaltingcolumn.Colorimetrywasusedtodetermine theactivityoftherecombinantprotein.Results TherecombinantT—hCBSproteinwasoverexpressedinE.coli,withayieldof 44mg/Landtheactivityofaboutl100U /mg.Therelativemolecularmasswas45kDbv15 SDS,whichwasconsist— entwiththeexpe

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