高效液相色谱法测定六味地黄颗粒中马钱苷含量.docVIP

高效液相色谱法测定六味地黄颗粒中马钱苷含量摘 要 目的：建立测定六味地黄颗粒有效成分含量的方法。方法：采用HPLC对六味地黄颗粒中马钱苷的含量进行测定。结果：马钱苷在0.0808～0.4040μg具有良好的线性关系，平均回收率为99.96%，RSD=1.72%(n=5)。结论：该方法灵敏、重现性好，适用于六味地黄颗粒中马钱苷的含量测定。 关键词 六味地黄颗粒 马钱苷 高效液相色谱法[HT ] 仪器与试剂 美国Waters 600 Controler高效液相色谱仪；ReliaSil-C18柱；德国Sartorius BP211D(1/10万)电子天平；马钱苷由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。 方法与结果 色谱条件：色谱柱：ReliaSil-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H3PO4(5：40：20：585)；流速：1.2ml/分；检测波长：236nm；柱温：40℃。 对照品溶液的制备：精密称取马钱苷对照品0.0202mg，加入50%甲醇制成20?2μg/ml的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的本品内容物，研细，取0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，加热回馏1小时，防冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，置中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm，干法装柱)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量溶解，并转移至10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 阴性对照品溶液的制备：取缺山茱萸的样品2.0g，同法操作，即得。 线性关系考察：精密吸取马钱苷对照品溶液(20.2μg/ml)2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，依法测定。根据对照品的峰面积积分值对马钱苷的进样量绘制标准曲线，得回归方程：y=6668.15x+1315461.4，r=0.9999。结果表明：马钱苷在0.0808～0.4040μg之间呈良好的线性关系，由于标准曲线经过原点，故采用外标一点法。 方法学考察：①精密度实验[1]：分别吸取10μl的对照品溶液，重复进样5次，测得其峰面积的RSD为1.23%。②稳定性试验：精密吸取对照品溶液10μl，于0、2、4、24、36小时分别依法测定，结果峰面积的RSD为0.58%，马钱苷在36小时内测定结果稳定。③重现性实验：精密称取同一批样品5份，按供试品溶液的制备和测试方法测定，结果供试品含量的RSD为1.03%。④回收率实验：精密称取已知样品含量(2.61492mg/g)样品5份，分别加入一定量马钱苷，测定，并根据样品含量及马钱苷对照品加入量，计算回收率。结果平均回收率为99.96%，RSD为1.72%(n=5)。 样品测定：依法测定050801、050802、050803三批样品，马钱苷含量分别为0.71mg/g、0.76mg/g、0.69mg/g，均值为0.72。 结论：经过多次实验，现本品中马钱苷含量暂定为≥0.54mg/g。 讨 论 六味地黄颗粒是滋补肾阴的传统处方，山茱萸是方中臣药，含有熊果酸、齐墩果酸，马钱苷、苹果酸、没食子酸等 [2]。《中国药典》采用薄层扫描法测定山茱萸药材、六味地黄颗粒中熊果酸的含量，操作时间长，步骤繁琐，显色误差大，稳定性和重复性相对较差；HPLC法则简便易行，准确灵敏，重复性好。熊果酸的色谱条件没有马钱苷的色谱条件稳定，故选用马钱苷进行含量测定[3]。 流动相考察：参照《中华人民共和国药典》2005年版(一部)山茱萸含量测定项下测定马钱苷的流动相及相关文献，通过实验摸索，流动相选用四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H3PO4(5：40：20：585)马钱苷具有较好的峰型和相对合理的保留时间和分离度，故选用四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H3PO4(5：40：20：585)为马钱苷分析的流动相。 样品检测波长：取马钱苷对照品，加甲醇制成20.2μg/ml溶液，作为对照品溶液，进行紫外检测。结果选定测定波长λmax=236nm。且溶剂阴性无干扰。 本实验建立的高效液相色谱法，测定加样回收率高，是一种快速、简便、较准确的方法。 参考文献 1 李玉红， 陈燕， 易进海.HPLC测定马钱苷的含量.华西药学杂志，2002，17(4)：295. 2 马国营.中药山茱萸的高效液相色谱指纹图谱及其聚类分析.西安交通大学学报，2006，2. 3 晏桂敏，林燕飞.山茱萸中马钱苷含量测定的样品处理方法改进.中国药业，2005：10. 1