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黑布药膏对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖影响[摘要]目的：探讨黑布药膏对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：成年大耳白兔24只，建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型，21天后,将瘢痕动物模型随机分为黑布药膏治疗组和瘢痕模型组，在黑布药膏治疗组瘢痕局部涂抹黑布药膏，每3天一次。在用药后第2、4、6、8周分别切取两组瘢痕组织，对比研究在瘢痕形成过程中黑布药膏对兔耳瘢痕成纤维细胞的影响。采用HE染色法观察瘢痕形态，计算瘢痕增生指数和成纤维细胞密度；采用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。结果：黑布药膏治疗组和模型对照组比较，PCNA蛋白表达明显减弱(P 3结果 3.1 瘢痕增生指数的比较：黑布药膏可降低瘢痕增生指数，从上皮化第4周开始治疗组与模型组有显著性差异（P＜0.01），并随着时间推移，瘢痕增生指数降低愈加明显，见表1。 3.2 成纤维细胞密度的比较：模型组成纤维细胞密度明显高于正常组，与正常组比较有显著性差异（P＜0.01），在上皮化后4周达到最高值，之后逐渐降低。黑布药膏可降低成纤维细胞密度，与模型组比较有显著性差异（P＜0.05），见表2。 3.3 PCNA检测结果：正常皮肤表皮基底细胞层PCNA阳性表达，真皮层阳性表达较少。模型组除基底细胞PCNA阳性表达及部分棘细胞层和颗粒细胞层呈阳性表达外，真皮层见大量PCNA阳性表达细胞，在上皮化后4周达到最高值，与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)。黑布药膏治疗组PCNA阳性细胞较模型组明显减少，相比有显著性差异(P＜0.01)，见表2。 4讨论 4.1 HS是皮肤创伤后组织过度修复的结果，其特征为大量结缔组织基质、尤其是胶原的过度合成与沉积，而成纤维细胞是产生胶原等细胞外基质的功能性细胞，成纤维细胞的过度增殖导致大量成纤维细胞及其分泌的细胞外基质沉积，从而导致HS的形成。如何从细胞数量上抑制其增殖是本实验研究的重点。 4.2 中医认为，瘢痕的形成多由风火气郁，痰湿凝聚，气滞血瘀，余毒搏于肌肤所致。黑布药膏是赵炳南的经验方，其组成为：老黑醋250g，五倍子100g，蜈蚣1.2g，蜂蜜100g。方中老黑醋软坚解毒，五倍子收敛解毒，蜈蚣破瘀解毒，蜂蜜调和诸药，共奏破瘀软坚之功效。 4.3 PCNA是一种相对分子质量为32736～35712的核蛋白，是一种细胞周期调节蛋白，直接参与DNA的合成，PCNA的出现明显与细胞增殖有关，在静止细胞，其量很少，G1期增加，S期达到高峰，G2、M期明显下降[2]。PCNA在DNA复制过程中起重要作用。PCNA的表达已证实与细胞的增殖状态密切相关[3]。若通过某种物理的或化学的手段来减少PCNA的含量，则加快HS的消退。 4.4 本实验研究结果表明，黑布药膏治疗兔耳HS是有效的。瘢痕形成基础是成纤维细胞增殖和胶原的过度沉积，经黑布药膏治疗后，SEI和NA下降，说明黑布药膏可以抑制成纤维细胞增殖和胶原合成。HS组织真皮层及表皮角质层见大量PCNA阳性表达细胞，其阳性细胞率较正常皮肤明显增高，表明HS的形成与创伤修复过程中成纤维细胞的增殖活性增高有关，大量增殖活跃的成纤维细胞及其所分泌的胶原等细胞外基质构成HS形成的物质基础。黑布药膏治疗组PCNA阳性细胞率较正常组明显减少，说明黑布药膏对可抑制呈增殖活性的HS成纤维细胞，使其DNA的合成明显减少，增殖受阻。为深入研究黑布药膏对HS的作用机制及临床应用提供了理论和实验依据。 [参考文献] [1]赵丽,王莹,关洪全. 黑布药膏对兔耳增生性瘢痕Bax和Bcl-2 m RNA表达的影响[J].中国美容医学,2011,20(6):764-766. [2]Oqata K,Oqata Y,Nakamura RM,et a1．Purification and N-terminal amino acid sequence of proliferating cell nuclear antigen(PCNA)/cyclin and development of ELISA for anti-PCNA antibodies[J].J lmmunol,1985,135(4)：2623-2627. [3]Prelich G,Tan CK,Kostura M,et al.Functional identity of proliferating cell nuclear antigen and a DNA polymerase-delta auxiliary protein[J].Nature,1987,326(6112):517-20. [收稿日期]2011-04-25 [修回日期]2011-06-14