纤维素酶、尿素对奶牛生产性能和生化指标地影响.pdf

纤维秦酶，尿素对奶牛生产性能和生化指标的影响 缩略词表 4 华中农业大学2006届硕士学臼论文 1文献综述 1．1纤维素酶在奶牛营养中作用机理的研究进展 1．1．1纤维素酶的结构和来源 纤维素酶是指能降解纤维素的一类酶的总称，是一个由多种水解酶组成的复杂 酶系，主要来自于真菌和细菌。根据各酶功能的不同主要分为三类：(1)葡聚糖内 来自于真菌简称为EG；来自于细菌简称为ten)，这类酶一般作用于纤维素内部的 非结晶区，随机水解p一1，4糖苷键，将长链纤维素分子截短，产生大量带非还原性 末端的小分子纤维素．(2)葡聚糖外切酶(1，4-p-D．glucan 这类酶作用于纤维索线状分子末端，水解13-I，4糖苷键，每次切下一个纤维二糖分 纤维素结合结构域(cellulose．binding (I)催化结构域：呈球形，主要体现酶的催化活性及对特定水溶性底物的特异性． 内切酶的活性位点位于一个开放的裂口(cleR)中，它可结合在纤维素链的任何部 位并切断纤维素链。外切酶的活性位点位于一个长环状通道中，它只能从纤维索链 的非还原性末端切下纤维二糖。 (2)纤维素结合结构域：CBD在纤维素酶中位于 根据CBD分子大小及氨基酸的相似性将已知的CBD分成了10个家族，大部分的 CBD位于家族I、Ⅱ、Ⅲ。人们推测，CBD可能通过芳香环与葡萄糖环的堆积力吸 附到纤维素上，由CBD上其余的氢键形成残基与相邻葡萄糖链从纤维素表面脱离开 来，以利于催化区的水解作用．但有一些纤维素酶并没有CBD，如热纤梭菌是依靠 保持CD和CBD之间的距离，也可能有助于不同酶分子问形成较为稳定的聚集体。 细菌纤维素酶的连接桥富含脯氨酸，苏氨酸，而真菌纤维素酶的连接桥富含甘氨酸、 菌纤维素酶有两个酶切位点可将CBD与连接桥分别切去，而真菌纤维素酶一般只有 一个酶切位点可将CBD与连接桥一同切去． 所有能分解晶体纤维索的真菌，均能或多或少的分泌纤维素酶，所以纤维素酶 的真菌性来源非常广泛．目前研究和生产中采用的菌种大多是木霉、曲霉和青霉等 5 纤维素酶、尿素对奶牛生产性能和生化指标的影响 (盂雷，2002)．有人综述了纤维素酶的来源，认为绿色木霉的得率最高。目前研究 的热点之一是通过对己知纤维素酶产生菌进行诱变，以增加产酶微生物菌种，国内 氏木霉，经物理、化学因子诱变，获得了高活力菌株Ea3—967和N2-78．利用基因 工程手段也是提高纤维素酶产量和质量的重要方法．通过克隆出真菌的纤维素酶基 因，将其与高效表达基因的启动子和染色体起始位点融合则可表达，并且表达量增 加；同时利用基因工程手段对纤维素酶分子进行改造，增加其活性并提高耐受性． 能分解纤维素的细菌如纤维粘菌、热纤梭菌及纤维杆菌等亦能分泌纤维素酶． 但由于细菌分泌的纤维素酶量少(低于0．Ig／L)，且产生的酶属胞内酶或粘附在细 胞壁上，难以进行工业化生产，所以很少用细菌作为纤维素酶的生产菌种．不过近 年来国外利用纤维杆菌深层通气培养生产纤维素酶效果较好． 反刍动物能消化纤维类饲料，主要由于其瘤胃内的微生物能分泌纤维素酶，如 细菌与纤毛原虫。因此可以利用瘤胃液获得纤维素酶的粗酶制剂。国内外已进行了 这方面的研究工作，但还没能应用到规模化生产中来．自1998年以来，人们在多 种动物体内得到的内源性纤维素酶大都属于内切．B．1,4．葡聚糖酶．例如，两种植 这4种EG均属于糖苷水解酶第5家族(GHF5)，并且其中一个含有细菌式样的纤维 员，并且通过基因组PCR的方法得到了证实，这是从甲壳类中得到的第一个内源性 隆得到了内源性EG的cDNA，这些EG均由448个氨基酸残基组成，并且均属于 incognita) 中分离到了一个EG(被命名为MI-ENGI)，它包括一个催化结构域和由富含羟基的氨 基酸残基相连的一个结合结构域组成，它的催化结构域属于GHF5，CBD属于第1I kD，最适温度(．rh)和最适 家族【包括细菌水解酶的CBDs)，它的分子量为53．4