丙肝患者IgM特异性激活补体类循环免疫合物检测及意义.docVIP

丙肝患者IgM特异性激活补体类循环免疫合物检测及意义 　 作者：张文军 唐 晖 贾雪芳 李红枝 【关键词】 肝损伤 　　摘 要: 目的:探讨丙肝患者体内IgM特异性激活补体类循环免疫复合物（即IgM/C3-TCIC）的变化及其意义。方法:采用捕捉 法ILISA，对丙肝患者血清中的IgM/C3-TCIC进行检测，并将其与患者的性别、年龄、病程及谷丙转氨酶（ALT）进行统计学分析。结 果:80例丙肝患者血清中有52例检测呈阳性，IgM/C3-TCIC的阳性率为65.0%。IgM/C3-TCIC的阳性率与ALT相关，在ALT升高组 IgM/C3-TCIC的阳性率要显著高于ALT正常组（ Plt;0.05 ）;而与患者的病程、性别及年龄则均无明显相关（ Pgt;0.05 ）。结论:丙肝患 者体内IgM/C3-TCIC可能直接参与了对肝组织损伤的过程，其病理意义值得重视。 　　关键词: 丙肝病毒（HCV）; IgM/C3-TCIC; ELISA; 肝损伤 　　自双特异性循环免疫复合物（Two-component-determined circulating immune complexes，TCIC）的概念提出以来，其病理 生理意义的研究受到广泛重视 ［1～3］ 。本研究采用捕捉法 ELISA，对丙肝患者血清中的IgM特异性激活补体类免疫复合 物（即IgM/C3-TCIC）进行检测，旨在阐明这类双特异性循环 免疫复合物在丙肝患者体内的变化及其临床意义，现报告如 下。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料 　　羊抗人C3抗血清，羊抗人IgM抗血清均为上海生物制品 研究所产品，经硫铵-DEAE 32 层检提取IgG组分。酶 抗体为本 室自制，采用简易过碘酸钠法 ［4］ 将HRP（辣根过氧化物酶， Sigma）标记到抗人IgM的羊IgG组分上。 　　1.2 实验对象 　　实验组包括80例丙型肝炎患者血清标本（其中男性37 例，女性43例），对照组包括115例健康人血清标本（其中男 性50例，女性65例）。 　　1.3 IgM/C3-TCIC的检测 捕捉法ELISA的操作步骤如下:用0.1M，pH9.6的碳酸 缓冲液将抗人C3的羊IgG稀释至7.5ug/ml，加入反应板，每 孔0.1ml，4℃ 18～24小时，用0.01M，pH7.4 PBS-T洗涤3次， 加入用生理盐水按1∶75稀释的血清标本，每孔0.1ml，4℃ 18 ～24小时，同上洗涤;用含2.5%兔血清的PBS-T将HRP-抗人 IgM的羊IgG作1∶1000稀释，每孔0.1ml，37℃ 1小时，同上 洗涤;加入TMB-H 2 O 2 底物溶液，每孔0.1ml，37℃避光反应 45min;2M的H 2 SO 4 终止反应，最后在BIO-RAD 680全自动酶 标仪（美国产品）上测OD值。每块反应板分别以混合人血清 和以羊血清的作阳阴性对照。以阳、阴对照血清OD值的20 次均值，按下面的公式对实验标本的OD值进行校正: 被检标本OD校正值= 阳、阴性对照血清20次OD均值之差 阳、阴性对照血清实测OD均值之差 ×被检标本复孔实测OD 均值。 　　2 结果 　　2.1 IgM/C3-TCIC的阳性界值 采用捕捉法ELISA检测115例健康人血清标本，由于CIC 与年龄有关 ［1］ ，故以不同年龄组计算 X和SD，以X±2SD为阳 性临界值，≥X±2SD者为升高的阳性标本，结果如表1。 　　表1 正常人IgM/C3-TCIC的阳性界值（略） 　　2.2 丙肝患者IgM/C3-TCIC的阳性率 采用捕捉法ELISA对80例丙肝患者的IgM/C3-TCIC进 行检测，结果有52例呈阳性，阳性率为65.0%。对不同年龄 组之间进行统计学分析，发现15～、30～、40～和50～年龄组 IgM/C3-TCIC的阳性率依次为66.7%、63.5%、64.5%和 66.7%，相互之间均无显著性差异 （Pgt;0.05） ，如表2所示。 此外，不同性别之间IgM/C3-TCIC的阳性率亦无明显差异。 表2 丙肝患者IgM/C3-TCIC的阳性率 　　　2.3 丙肝患者血清ALT与IgM/C3-TCIC阳性率的关系 比较ALT升高组与正常组中IgM/C3-TCIC的阳性率，结 果如表3。表3 丙肝患者ALT与IgM/C3-TCIC阳性率之间的关系 　　2.4 丙肝患者的病程IgM/C3-TCIC阳性率的关系 80例丙肝患者按病程又分为两组:病程不足20天的患者 归为一组，共有37例;病程超过20天的患者归为另一组，共 有43例。各组中IgM/C3-TCIC的阳性率见表4。可以看出， IgM/C3-TCIC的阳性率在长病程组明显高于短病程组，两者之 间具有极显著性差异（ Plt;0.0