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分蘖葱头水溶性总黄酮含量测定方法探究 　 作者：张沐新1，张新茹2，刘松艳，杨晓虹 【摘要】 目的采用比色法测定东北特产分蘖葱头中水溶性总黄酮的含量。方法以槲皮素为对照品，以三氯化铝为显色剂，检测波长为431 nm。结果线性范围为1.068～12.816μg·ml-1(r=0.999 8)，平均回收率为99.8%，相对标准偏差为0.8%(n=9)。结论该法测定分蘖葱头中水溶性总黄酮的含量简便可行，准确度高。 【关键词】 分蘖葱头; 水溶性总黄酮; 槲皮素 分蘖葱头为百合科葱属植物Allium cepa L. var. agrogatum Don.，盛产于我国东北各地，其鳞茎多为民间食用，未作药用。其化学成分及药理作用的研究，除我校药物化学教研室之外未见报道。本教研室对分蘖葱头的化学成分进行了分离纯化研究，共得到了13个化合物。其中黄酮类化合物含量居多，主要有槲皮素、山萘酚、槲皮素4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素3,4’-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素3’-甲氧基-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等化合物[1，2]。药理实验证实该植物中的黄酮类化合物具有调节血脂，抗脂肪肝作用及预防动脉粥样硬化发生和发展的作用(苏曼曼.分蘖葱头提取物对实验性高脂血症大鼠血脂代谢的影响. 吉林大学硕士学位论文. 2003～2005)所以我们以主要黄酮类成分都具有的母核部分槲皮素作为对照品，采用比色法进行了分蘖葱头总黄酮含量测定的研究，以期为分蘖葱头的质量评价提供内在依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料槲皮素对照品(99.54%，吉林大学药学院药物化学教研室提供);95%医用酒精(吉林金鑫公司);其余试剂均为分析纯。 　　分蘖葱头购于长春市郊区，经吉林大学药学院生药学教研室主任王广树教授鉴定为百合科葱属植物分蘖葱头Allium cepa L. var. agrogatum Don.。 　　1.2 仪器WFZ75型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，SHB-III顺循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)，JT1001电子天平(上海精天电子天平仪器有限公司)，AR1140电子分析天平(奥豪斯国际贸易有限公司)，KQ3200DE医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，HH-2恒温数显水浴锅(常州国华电器有限公司)，101-1A电热鼓风干燥箱(天津市泰斯仪器有限公司)。 　　2 方法与结果 　　2.1 分蘖葱头总黄酮样品的制备精密称取100 g分蘖葱头干燥鳞茎，用3倍量70%乙醇加热回流3次，1 h/次，将3次溶液合并，减压回收得流浸膏，加水溶解，过滤，滤液备用。 　　2.2 最大吸收波长的确定分别准确称取干燥至恒重的槲皮素对照品和总黄酮样品适量，分置50 ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并配制成每毫升含槲皮素(或总黄酮)54 μg的溶液，分别精密量取此溶液4.0 ml，分置25 ml量瓶中，精密加入5%三氯化铝8.0 ml，加无水乙醇溶液至刻度，摇匀放置10 min。另取一25 ml量瓶，精密加入5%三氯化铝8.0 ml，加无水乙醇溶液至刻度，以此为空白，在波长300～500 nm之间进行扫描，确定槲皮素对照品和总黄酮样品溶液的最大吸收波长均为431 nm，以此波长为测定波长。 　　　2.3 槲皮素标准曲线的制定精密称取干燥至恒重的槲皮素标准品适量，用无水乙醇溶解并配制成每毫升含槲皮素54 μg的溶液，精密吸取该溶液的0.50，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分置25 ml容量瓶中，各精密加入5%三氯化铝的乙醇溶液8.0 ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀放置10 min，另取一个25 ml容量瓶，精密加入5%三氯化铝的乙醇溶液8.0 ml，用无水乙醇稀释至刻度，以此为空白。在431 nm处测定吸光度。测定结果见表1。表1 槲皮素标准曲线的测定 　　由此可见，槲皮素浓度在1.068～12.816 μg·ml-1范围内线性关系良好。 　　2.4 提取物中总黄酮的含量测定以水溶性黄酮的含量为考察指标，将乙醇浸膏加水溶解，测量总体积后以槲皮素为代表成分测定溶液中总黄酮的含量。取“2.1”项下样品，加水溶解后过滤，滤液定容于50 ml置量瓶中，从中精密吸取5 ml于100 ml烧瓶中，加7.5%的硫酸10 ml，水浴加热回流40 min，取出冷却后滤过，滤渣及滤纸洗至中性，剪碎后放入100 ml圆底烧瓶中加无水乙醇回流2次，各加无水乙醇25和15 ml，分别回流30和15 min，取出滤液，定容在50 ml量瓶中，精密量取8 ml溶液2份，分置25 ml量瓶中，1份加无水乙醇至刻度作对照，另一份精密加入5%三氯化铝乙醇溶液8.0 ml，再用无水乙醇定容至刻度，在431