雌激素对乳腺癌中骨形态发生蛋白—6表达影响.pdfVIP

南开大掌医掌院硕士(掌位)论文正文·前言 程度成正比，可以作为预后不良的指标【11]。 乳腺癌作为一种好发骨转移的常见肿瘤，在我国的发病率已经呈逐年增高 的趋势。而在美国，乳腺癌已经占北美女性癌症死亡原因的第二位。故对乳腺 癌的病因、发病机制和转移的研究，在降低乳腺癌的发生率和提高疗效方面， 变得非常重要。乳腺细胞系的增殖是受甾体类固醇激素和肽类激素的调节。在 这些类固醇激素中，雌激素是一种能促进乳腺上皮细胞增生的激素，同乳腺癌 的发病有密切关系。一般认为，乳腺上皮细胞首先在某些致癌因素的作用下发 生恶变，雌激素一受体系统又使该恶变细胞获得生长优势而成为肿瘤。 乳腺癌的发生和转移过程中，雌激素能直接对含雌激素受体的乳腺癌细胞 产生作用，调节癌细胞的基因表达和表型特征，刺激癌细胞的自分泌，提高生 长刺激因子的水平并降低生长抑制因子的水平【121。而且研究发现雌激素受体阳 性的肿瘤细胞更容易发生骨转移[”]，暗示了雌激素也可能参与了乳腺癌的骨转 移过程。BMP--6作为能够在乳腺癌中表达的一个生长因子，同肿瘤的发生和 转移有密切关系。为了研究雌激素对于乳腺癌中BMP--6表达水平的影响，在 本研究选用了雌激素受体(Estrogen 和雌激素受体阴性的MDA．MB．231，分别用不同的雌激素浓度处理，分析BIVIF 一6的表达水平变化。为了进一步研究雌激素影响BMF--6的表达方式，我们 PromotorLuciferase 构建了人BMP．6启动子的荧光素酶报告基因质粒(BMP一6 gene，BMP6 PLR瞬时转染入MCF．7细胞中，通 Report PLR)，将pGL3--BMP6 过分析雌激素作用下的BMP--6启动子活性，了解雌激素在乳腺癌中调控BMP 一6的方式，揭示雌激素促进肿瘤发生和转移的内在机制，并为研究BMP一6 在肿瘤中的作用奠定一定基础。 南开大掌医学院硕士(掌位)论文正文·实验材料 2实验材料 2．1实验原材料 正常人外周血由天津市第一中心医院检验科提供 2．2细胞系，菌株和载体 体阴性)购买于天津肿瘤医院 Blue由本实验室保存和制备 2．2．2宿主菌株及感受态细胞：大肠杆菌sL．1 basic载体(购自美国Promega公司) 2．2．3载体：pGL．3 2．3引物设计 5．0软件辅助设计引物 以NCBI中人类基因组草图为依据，用PrimerPrimer 序列，由上海生物工程公司负责合成。 2．3．1人BMP．6基因及GAPDH的引物 GAPDH上游引物(GAPDH 下游引物(GAPDH 2．3．2人BMP．6启动子基因的引物： II酶切位点) 2．4分子生物学试剂盒 Plasmid试剂盒购自上 DNA快速回收试剂盒购自北京鼎国公司。QIAprep PlusSV 海基因公司。Wizard DNA纯化试剂盒购自美国Promega公 Minipresps 司。荧光索酶报告基因分析试剂盒购自美国Promega公司。BCA蛋白定量试剂 盒购自美国Pierce公司。 2．5生物酶 DNA连接酶购自大连Takara公司。 各种相关限制性内切酶、LA．Taq酶、T4 DNA Taq polymerase酶购自北京鼎国公司。RNA反转酶购自上海生物工程公司 2．6主要化学试剂 南开大掌医掌院硕士(掌位)论文正文·实验材料 2．6．1雌激素(17--B Merck公司；RnaseA购自美国Roche公司； 2．6．2 RNA提取及RT-PCR