第四章 方法验证.ppt

Chapter 4 Sample preparation and Validation of analytical method 第四章 药物定量分析与分析方法验证 第一节 定量分析样品的前处理方法 概述 不经有机破坏的分析方法 经有机破坏的分析方法 概 述 适用药物对象： 含金属元素（Bi、Al、Mg、Zn等） 含卤素元素（F、Cl、I） 含氮、硫、磷等 前处理方法： 依据待测元素在药物分子中结合的牢固程度， 各有不同 酒石酸锑钾 富马酸亚铁 卡巴胂 不经有机破坏的分析方法 适用于： 所含金属离子或待测元素易于解离的药物 常用前处理方法： 直接测定法 经水解后测定法 经还原分解后测定法 常用测定方法： 配位滴定(Ca2+、乙二胺四乙酸二钠)，氧化还原滴定，沉淀滴定 不经有机破坏的分析方法－－应用示例 葡萄糖酸锑钠的测定 取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml，密塞、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg的Sb。 经水解后测定法－－分析示例 三氯叔丁醇的测定 原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。 经还原分解后测定法－－分析示例 泛影酸的含量测定： 　取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠试液30mL与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15mL，洗涤液与滤液合并，加冰醋酸5mL与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定。每1mL硝酸银滴定液（ 0.1mol/L ）相当于20.46mg的C11H9I3N2O4。 经有机破坏的分析方法 适用于金属原子与碳原子结合牢固的药物；以及大量生物基质中药物的测定 湿法破坏 (据分解剂组合形式不同：硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸盐法等) 干法破坏 湿法破坏－－凯氏定氮法 凯氏定氮法（Kjeldahl method，）是一种常用的确定有机化合物中氮含量的检测方法。这种方法是由凯耶达尔在1883年发明的。 凯氏定氮法的普遍适用性、精确性和可重复性已经得到了国际的广泛认可。它已经被确定为检测食品中蛋白质含量的标准方法。 凯氏定氮法 方法 将有机化合物与硫酸共热使其中的氮转化为硫酸铵。在这一步中，经常会向混合物中加入硫酸钾来提高中间产物的沸点（从169℃到189℃）。样本的分解，混合物会变得无色且透明。 在得到的溶液中加入少量氢氧化钠，然后蒸馏。这一步会将铵盐转化成氨。而总氨量（由样本的含氮量直接决定）会由反滴定法确定：冷凝管的末端会浸在硼酸溶液中。氨会和酸反应，而过量的酸则会在甲基橙的指示下用碳酸钠滴定。滴定所得的结果乘以特定的转换因子就可以得到结果。 凯氏定氮法 通过凯氏定氮法测得的含氮量一般被称作总凯氮量。总凯氮量有时并不能真正地反映样本中的蛋白质含量，因为所测定的部分含氮量可能不是由蛋白质转化来的。 如今，凯氏定氮法已经可以自动化进行，一些催化剂（如氧化汞或硫酸铜）也被使用来提高反应速率。 样本的分解： 蛋白质 + H2SO4 → (NH4)2SO4(aq) + CO2(g) + SO2(g) + H2O(g) 铵盐的分解： (NH4)2SO4(aq) + 2NaOH → Na2SO4(aq) + 2H2O(l) + 2NH3(g) 氨的固定： B(OH)3 + H2O + NH3 → NH4+ + B(OH)4– 返滴定： B(OH)3 + H2O + Na2CO3 → NaHCO3(aq) + NaB(OH)4(aq) + CO2(g) + H2O 干法破坏 干法破坏法适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环类有机物）以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。 高温炽灼破坏 试样被强酸或强碱熔融分解，置于铂皿中500～1000℃下高温处理，该法对试样分解的效果优于湿法。