荧光定量PCR技术及其在动物检疫中的应用.pdfVIP

No．4 2008年第4期V01．18 AND SCIENCE 检验检疫科学INSPECTIONQUARANTINE 荧光定量PCR技术及其在动物检疫中的应用 刘文波杨元杰张金信王玲 卜春玲孙德刚 (黄岛出入境检验检疫局，山东青岛266555) 摘要：荧光定量PCR技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术．具有能实 时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、特异性好等优点．巳广泛应用于医学和生物学领域。本文主要对荧光 定量PCR技术在动物检疫领域的应用进行综述。 关键词：荧光定量PCR技术。动物检疫。7应用 中圈分类号：$855．Q503 1前言 法检测的灵敏度可达10cfu／mL，定量检测的批间和批 timefluorescent 实时荧光定量PCR技术(real 内差异均小于5％。能快速准确、特异、敏感地对大 quantitativePCR，FQ-PCR)通过在PCR反应体系中加 入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进 的检测提供了新的方法。 程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。它 2．1．3金黄色葡萄球菌的检测 实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR 金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的主要致病菌之 相比，具有特异性和灵敏性更强、无污染性、能实现 一，其传统方法包括选择性培养、生化鉴定等步骤， 多重反应、自动化程度高、具实时性和准确性等特 耗时长，灵敏性差，很难满足食品安全快速检测要 点，目前已广泛应用于基因表达研究、转基因研究、 求。IngeborgHein等嘲根据金黄色葡萄球菌nuc基因 微生物病原体定量检测、药物疗效考核等领域。 设计引物和探针，建立了检测金葡菌的FQ—PCR方 2荧光定量PCR技术在动物检疫中的应用 法，并进一步研究了干酪中污染金葡菌的检测情况， 2．1在细菌检测中的应用 发现该方法可检测到1．5x 2．1．1炭疽杆菌的检测 因／29，且nuc基因拷贝数与金葡菌数有很好的对应性 炭疽杆菌是一种重要的人畜共患病病原，具有高 致病性，而且是重要的生物战剂之一，因此，建立一 品RT—PCR试剂盒，如由深圳出入境检验检疫局和深 种简单快速的炭疽杆菌检测方法非常必要。陈苏红掣q 圳太太基因工程有限公司联合研发的。食源性致病菌 以炭疽杆菌编码炭疽热毒素的px01质粒上的pag基实时荧光PCR检测试剂盒”，具有灵敏度高、特异性 因及编码荚膜的px02质粒上的cap基因为靶，建立强、使用简便等特点，为金黄色葡萄球菌的快速准确 了一种简便而特异的rQ—PCR检测方法。该法检测的鉴定提供了相应的技术保障。 灵敏度达103拷贝，并能区分炭疽杆菌与其他蜡样杆 2．1．4沙门氏茵的检测 菌，能简便、快速准确、特异地对炭疽进行定量分析。 沙门氏菌菌型繁多，分布广泛，是重要的人畜共 2．1．2大肠杆茵0157．H7的检测 患病的病原体，也是食源性疾病特别是食物中毒最常 大肠杆菌0157：H7是引起人类腹泻、出血性肠炎、见的病原体。目前对沙门氏菌的检测主要依赖于常规 溶血性尿毒综合症的重要病原体，流行病学研究表明， 微生物学方法，一般需要4—5d时间，比较费时费力。 其感染剂量低于10cfu／mL。因此，对低剂量大肠杆菌 孔繁德簪棚根据沙门氏菌保守的fimY基因设计合成了 0157：H7的检测显得尤其重要。·由于传统的分离培养 引物和TaqMan探针，建立了快