产β-甘露聚糖酶菌株的筛选及其产酶培养基的优化.pdfVIP

2009年4月 广西轻工业 第4期(总第125期) GuANGxIJouRNALoFLIGHT小DusTRY 食品与生物 产p一甘露聚糖酶菌株的筛选及其产酶培养基的优化 周骏江，熊波，汪倬 (武汉生物工程学院生物工程系，湖北武汉430415) 【摘 要】从土壤中分离筛选出5株产胞外p一甘露聚糖酶的菌株。其中xB2茵株的摇瓶培养液的粗酶活力达 KClOl5、K2HPo．O．1、FeSo．o．001。此条件下酶活力高达9．12u／ml。 【关键词】 B一甘露聚糖酶；菌种筛选；发酵优化 【中图分类号】TQ925【文献标识码】A 【文章编号】1003—2673(2009)04—22一02 man— B一1，4一D一甘露聚糖酶(B一1，4一D—mannan富集培养基(％)：魔芋精粉2．O，酵母膏O．5，蛋白胨0．3， NaClO．5： nanohydrola8e，EC．3．2．1．78)是一类能水解含有B一1，4一D一 甘露糖为主链的多糖(包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘聚糖 固体分离培养基(％)：魔芋精粉1．0，蛋白胨O．3，NaNO， 等)的内切醐”。该酶用途广泛，能分解魔芋葡甘露聚糖形成魔 O．001，琼脂1．0， O．3，MgS0．O．5，KCl0．5，K2HP0．O．1，FeS04 芋低聚糖。这些低聚糖具有低热、稳定、安全、无毒等良好特性， pH6．0； 是人体肠道内有益菌群——双歧杆菌的促生长因子。对调节肠 道菌群结构，增强人体免疫力有特殊功能，已成为食品生物技术 6．O； 0．5，K2HP040．1，FeS040．001，pH 领域研究的新热点之一。B一甘露聚糖酶作为工具酶用于对天 以上培养基在115℃，灭菌15min。 然多糖类物质糖链结构进行分析。复杂糖类或糖蛋白的糖链中 1．1．4主要仪器 常有p一甘露糖苷键存在。因此利用p一甘露聚糖酶水解其中 722S型可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)，恒温 的甘露多糖类物质，并测定水解产物中多糖类物质的种类和比 水浴锅，HQ45z恒温摇床(武汉中科科仪技术发展有限责任公 例，可推知其多糖结构。造纸工业中，将B一甘露聚糖酶运用于 司)，培养箱，无菌操作台，高压灭菌锅。 造纸工业纸浆的漂白工艺中。一方面可以得到比单纯用氯漂 1．2方法 白、碱提取更好的纸浆特性；另一方面，可以减少氯和碱的用量 1．2．1B一甘露聚糖酶酶活力测定 以及它们带来的环境污染问题；在纺织工业中用于纤维中半纤 酶活力的测定方法：采用DNS法四。 维素的降解、能有效去除纺织品所粘附的多余染料；在饲料工 酶活力单位定义：在上述反应条件下，每分钟由底物释放 业中用作酶添加剂，起到消除抗营养因子的作用口一。虽然B一 出相当于1“mol葡萄糖的还原糖所需酶量为1个酶活力单位 甘露聚糖酶的应用前景广阔，但目前总的来说，其低产和高成 (U)。 本限制了其应用范围和规模，能改变这种状况的最重要的途径 1．2．2菌种筛选 之一是筛选和培育产高活力B一甘露聚糖酶的高产菌株。 土样经无菌水稀释静置，取适量上清液接种于富集培养基 本研究从土壤中分离筛选出l株产B一甘露聚糖酶的高 中，37℃摇床培养10h。取摇瓶中粘度下降最明显培养液 产菌，并对其产酶条件进行优化，以期得到最佳产酶培养基组 1．OmL，用无菌水梯度稀释后涂布于同体分离培养基中，然后放 成和培养条件，获得高活力的B一甘露聚糖酶，为开发工业用 人37℃培养箱中培养24h，取出用刚果