产胞外β-葡萄糖苷酶乳酸菌的筛选及其酶学性质的初步研究 screening lactic acid bacteria to produce extracellular β-glucosidase and the preliminary studies of the enzyme properties.pdfVIP

产胞外13l一葡萄糖苷酶乳酸菌的筛选及其酶学性质的初步研究+ 万振堂，杨丽杰 (东北农业大学，乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨，150030) 摘 要 用荧光底物法从20种可利用纤维二糖的乳酸茵中筛选出10株产胞外B·葡萄糖苷酶的乳酸菌，在MRS 培养基中筛选出粗酶液酶活较高的l株植物乳杆菌KLDSI．0320，进一步研究了其产酶的特点、酶学性质，结果 表明，植物乳杆菌KLDSI．0320产生的胞外p一葡萄糖苷酶受底物纤维二糖的诱导，但与底物浓度有关。租酶液 酶活的最适pH为4．8，最适温度为37。C。在pH值为4．0，温度为48。C条件下仍具有酶活力。 关键词 乳酸菌，B·葡萄糖苷酶，纤维二糖 东北农业大学乳品科学教育部重点实验室菌种 B．葡萄糖苷酶(p—glueosidase)广泛存在于从微 生物到脊椎动物的各种生物中，它能够分解多种B． 库提供的20种乳酸菌，菌种来源为酸奶和青贮。 葡萄糖苷，如水杨苷(salicin)、纤维二糖(eellobio- 1．2培养基 se)、纤维三糖(celiotriose)、纤维四糖(cellotetrose)培养基：MRS培养基组成：蛋白胨10．0 g，牛肉 和对硝基苯．B．D．葡萄糖苷(pNPG)等。在食品风味 膏10．0g，酵母抽提物5．0g，葡萄糖20．0 g，三水醋 物质的释放和纤维素降解中具有重要作用…。 酸钠晶体5．0 1 mL，檬酸三铵2．0 g，吐温一80 g， 资料表明，一些乳酸菌可以利用纤维二糖(或纤 2．0 0．2 K2HP04g，MgS04·7H20 维三糖)作为碳源，表明某些乳酸菌可能含有分解纤 O．05 mL。固体培养基加入琼脂15．0 g，蒸馏水1000 维二糖的B-葡萄糖苷酶旧1。另外乳酸菌可以将葡萄 g，121℃高压蒸汽灭菌15min。将上述培养基中碳源 糖进一步发酵成乳酸，实现糖化的同时进行发酵 用10．0g纤维二糖替代即为纤维二糖MRS培养基 (SSF)。既解除了葡萄糖对B．葡萄糖苷酶的抑制作 (以下称为CMRS)。 用又可以将纤维素经纤维素酶降解产生的葡萄糖和 1．3主要试剂 纤维二糖转化成乳酸。乳酸菌与纤维素酶的联合作 化学试剂：PNPG(对硝基苯一B．D一葡萄糖苷)， 用在开发农作物植物纤维转化成一种稳定且可再生 的原料(例如乳酸，生物乙醇)工艺中有着很大的潜 力¨’4o。在食品研究中，乳酸菌B．葡萄糖苷酶近来被 为北京百泰克公司产品，其余均为国产分析纯试剂。 应用到大豆异黄酮植物雌激素的降解中，并取得较好 1．4 仪器 的效果”。·。然而国内外B．葡萄糖苷酶的研究大多 仪器设备：GL一21M冷冻离心机(上海市离心机 集中于真菌。对于乳酸菌来源的B．葡萄糖苷酶研究 报道较少。国外曾经有报道研究植物乳杆菌、干酪乳