放射性示踪技术及应用（毛飞）-5生物化学.pptVIP

5 放射性示踪法在生物学中的应用 研究植物的营养生理、对营养元素以及农药的吸收、转运、分配和积累规律 研究人和动物体内物质的吸收、分布、代谢和排泄情况 为分子生物学提供原子和分子水平的研究手段 应用于基因工程 17世纪：光学显微镜发明标志着生物医学发展中的里程碑 20世纪：放射性示踪技术的诞生对生物学推进同样重要 放射性示踪法在生物化学研究的应用 传统实验方法 整体实验 离体实验 传统实验方法的缺点 同位素示踪法 示踪量，不破坏体内生理过程的平衡 3H（T1/2=12.3 y), 14C(T1/2=5730 y), 液体闪烁测量; 加速器质谱法（AMS） P-32是纯β衰变核素，可以用来研究磷元素在植物的营养吸收、分布和代谢机理，也可以研究农药的吸收、转运、积累、降解、残留、排除等的规律。 5.1 放射性示踪法研究卡尔文循环 卡尔文循环（Calvin cycle,光合碳循环）： 即植物的叶绿体如何通过光合作用把CO2转化为机体内的碳水化合物的循环过程。用放射性示踪技术研究植物的光合作用过程，发现植物吸收CO2以及CO2被还原为碳水化合物并转化为葡萄糖。碳以CO2的形态进入并以糖的形态离开Calvin cycle 。 由于每一次放射性衰变能够指示出单个原子所处的位置，因此在各个化学反应的各个阶段，通过高灵敏度的探测器可以一直跟踪某种放射性核素的径迹，从而可以窥视用其他技术不能发现的反应机理和历程。 Calvin cycle首次揭示了自然界最基本的生命过程，对生命起源的研究具有重要意义。 1961，卡尔文获得诺贝尔化学奖。获奖原因：研究光合作用的化学过程。 美国加州大学贝克利分校的马尔文·卡尔文与他的同事们研究一种名叫Chlorella的藻（小球藻，绿藻的一种），是一种单细胞光合有机体，以确定植物在光合作用中如何固定CO2。此时C-14示踪技术和双向纸层析法技术都已经成熟，卡尔文正好在实验中用上此两种技术，用C-14 标记了用于光合作用的原料CO2 。将通过这种途径固定CO2的植物称为C3植物。 5.2 RIT研究光合作用 C6H12O6 + 6H2O + 6O2↑ 6CO2 + 12H2O 光能 叶绿体 光合作用的概念和公式 叶绿体与光合作用的过程 项目 光反应 碳反应 区别 反应部位 类囊体膜上 叶绿体基质中 与光关系 光引起，光下进行 光激活某些酶 反应步骤 ①光能吸收、转换②水光解、放氧③ATP生成与供能④电子与[H]传递 ⑤CO2固定⑥C3酸还原⑦C6糖合成⑧C5糖再生 主要产物 O2、ATP、[H] 葡萄糖、氨基酸等 反应实质 光能→电能→化学能 同化CO2形成储能有机物 两者联系 光反应为暗反应提供ATP和[H]，暗反应继续完成储能过程 光反应与暗反应的比较 五年后 1642年，赫尔蒙特(J.B. van Helmont) 柳树增重74.47kg 土壤减少0.06kg 水分是建造植物体的唯一原料 1771年，普里斯特利(Joseph Priestley) 绿色植物在光照下产生了氧气 1、蜡烛燃烧和小白鼠呼吸需要的是什么气体？ 2、这个实验说明什么问题？ 1864年，萨克斯(Julius von Sachs) 1、为什么对天竺葵先进行暗处理？ 2、为什么让叶片的一半曝光，另一半遮光呢？ 绿叶在光合作用中产生了淀粉 1880年，恩吉尔曼(C.Engelmann) 1、为什么选用水绵做为实验材料？ 2、为什么选用黑暗并且没有空气的环境？ 叶绿体是绿色植物进行光合作用的场所 光合作用释放的O2到底是来自H2O，还是CO2呢， 还是两者兼而有之？ 1930年，范尼特 (van Niet) CO2+ 12H2O C6H12O6+ 6H2O+ CO2+ 12H2O C6H12O6+ 6H2O+ 6O2 12H2S 6O2 12S 紫硫细菌 1941年，鲁本(S. Ruben) 2、同位素标记进行光合作用的实验，是为了弄清楚在光合作用中产生的氧到底是来自水还是二氧化碳？还是两者兼而有之？ 考虑一下，应标记哪一种元素？如何设计这个实验呢？ 1、同位素标记法 2、第二组向同种绿色植物提供H218O和CO2 1、第一组向绿色植物提供C18O2和 H2O C18O2+H2O CO2+H218O 光照 光照 O2 18O2 光合作用释放的O2全部来自于H2O, 所以 这项技术带来的结果往往是令人惊讶的！ 用氧的同位素18O分别标记H2O和CO2,使它分别成为H218O和C18O2。 进行两组光合作用的实验： CO2+ 2H2O* (CH2O)+H2O+ O2