HPLC法测定六味地黄丸中23-乙酰泽泻醇B的含量.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC法测定六味地黄丸中23-乙酰泽泻醇B的含量 谢晓华（厦门前埔医院 361008） 【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)35-0186-02 【摘要】 目的 建立一种准确、简便的方法用于六味地黄丸中23-乙酰泽泻醇B含量的测定。方法 采用高效液相色谱法，色谱条件为Kromasil-C18柱（150times;4.6 mm，5 mu;m）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱0～20 min，30%～60% A；20～60 min，60%～70% A；流速1.0 mL.min-1，柱温30 ℃，检测波长208 nm。结果 23-乙酰泽泻醇B的线性范围为2.5～50 mu;g/mL， r=0.9997，样品的平均回收率为101.0 %，RSD为3.28 %。结论 本法简便，快速，可靠，可用于控制制剂质量。 【关键词】 六味地黄丸 23-乙酰泽泻醇B HPLC 六味地黄丸由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成，具滋阴补肾功能。其处方为：熟地黄160g；酒萸肉80g；牡丹皮60g；山药80g；茯苓60g；泽泻60g。以上6味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜35～50g与适量的水，泛丸，干燥，制成水蜜丸。用于治疗肾阴亏损、头晕耳呜、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精、消渴[1]。处方中泽泻是六味地黄丸中“三补三泻”中的“一泻”， 泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep。的干燥块茎。具有利水渗湿，泄热，化浊降脂功效。23-乙酰泽泻醇B是泽泻的主要有效成分之一[2]，也是2010版中国药典中泽泻含量测定的指标性成分。但是2010版中国药典对六味地黄丸的泽泻质量控制只有薄层鉴别。为了进一步完善六味地黄丸的质量控制，本文研究了采用HPLC法测定六味地黄丸中23-乙酰泽泻醇B含量，现报道如下。 1 仪器与试药 仪器：LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），岛津LC solution工作站，万分之一电子天平（德国Sartorius公司，BP211D），超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，KQ-500E），L-550型台式大容量离心机(湘仪离心机仪器有限公司)。 试药：六味地黄丸（水蜜丸，北京同仁堂，产品批号0030865，0030867,0030819）；23-乙酰泽泻醇B对照品（上海同田生化技术有限公司，高效液相色谱（面积归一法）纯度大于98.5%）；乙腈（德国默克MERCK，色谱纯）；水为重蒸水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil-C18柱（150times;4.6 mm，5 mu;m）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱0-20 min，30%-60% A；20-60 min，60%-70% A；流速1.0 mL.min-1，柱温30 ℃，检测波长208 nm。在上述条件下, 23-乙酰泽泻醇B与其它成分达到基线分离, 样品与对照品的色谱图见图1、图2。 2.2 对照品溶液制备 取23-乙酰泽泻醇B对照品10mg，精密称定，置10mL的量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，即得。 2.3 供试品溶液制备 精密称取六味地黄丸，切碎，取6 g，精密称定，加入硅藻土3g，研匀，置100mL离心管中，加入乙腈60mL，超声波提取20min，离心取上清液，同法再提取两次，合并上清液，浓缩，用乙腈定容于5mL的量瓶中，摇匀，过0.45滤膜，取续滤液作为供试品溶液。 2.4 空白试验 按六味地黄丸处方比例制成缺泽泻的空白样品，再按“2.3”项下方法制备并在上述色谱条件下分别测定，记录色谱图。结果在与对照品相对应的色谱峰位处无干扰峰出现(见图3)。说明在本实验条件下，样品中的其他成分不干扰23-乙酰泽泻醇B的测定。 . 图1 23-乙酰泽泻醇B对照品HPLC图谱 . 图2　六味地黄丸样品的HPLC图谱（1：23-乙酰泽泻醇B） . 图3　六味地黄丸空白对照样品的HPLC图谱 2.5 方法学考察 2.5.1 线性与范围 精密吸取对照品溶液500 mu;L、200 mu;L、100 mu;L、50 mu;L、25mu;L于10 mL量瓶中，配成浓度为50、20、10、5、2.5 mu;g/mL的对照品溶液。精密吸取20 mu;L，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积（A）对分析物浓度（C）作线性回归，得23-乙酰泽泻醇B线性回归方程为A=9748.6 C+48445