实时荧光PCR方法在从业人员肠道致病菌筛查中的应用分析.docVIP

精品论文 参考文献 实时荧光PCR方法在从业人员肠道致病菌筛查中的应用分析 王琳 江鹏飞 李贻汉 钟学飘 朱淑萍 梁高洲 蔡剑辉 何小媚 周瑞香 （深圳市宝安区龙华预防保健所 广东深圳 518109） 【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）48-0097-02 【摘要】 目的 采用实时荧光PCR方法快速检测公共场所从业人员肠道致病菌，了解实时荧光PCR方法的应用价值。方法　随机采集10087份从业人员肛拭子标本分别进行实时荧光PCR方法和培养法检测沙门氏菌和志贺氏菌，分析实时荧光PCR方法的检出率。结果　10087份标本中，实时荧光PCR方法共检测出两种肠道菌16例，其中沙门氏菌11例，志贺氏菌5例；阳性率分别为1.09permil;和0.5permil;。而培养法检测出沙门菌为9例，志贺菌为4例，阳性率分别为0.89permil;和0.4permil;；另外男性两个致病菌阳性检出率比女性阳性检出率低。结论　实时荧光PCR方法可以很好的应用在从业人员肠道致病菌的筛查，该方法可以节省劳动力，降低工作人员的工作强度。并且可以节省从业人员拿到健康证时间。 【关键词】 实时荧光PCR 从业人员 阳性率 沙门菌和志贺菌是导致食物中毒的主要病原菌[1]尤其对儿童伤害极大[2]。也是 CDC对食品及公共场所从业人员每年定期体检时的必检项目。目前该项目流程尚无配套国家标准。大部分检测单位在执行过程中参考 《食品卫生微生物学检验 沙门氏菌》 （GB-T4789.4-2003）和 《食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验》（GB-T4789.5-2003）两个国家标准进行。目前的检测方法[3,4]周期长，使得从业人员健康证的颁发一般需要5个工作日。而荧光PCR方法结合培养法快速检测所需时间短，一般第三个工作日便可拿到。 1 材料与方法 1.1 对象 标本来源于2012年2月1日至2012年5月8日，在龙华预防保健所门诊体检的从业人员肛拭子共计10087份，其中男性标本为4600份，女性标本为5487份。 1.2 方法 1.2.1采样 用深圳市生科源技术有限公司生产的一次性多功能采样器采取肛拭子，采样时将采样器轻柔插入肛门内3cm处，轻轻旋转3周后取出，保证每个采样头都能够采到粪便标本，消除由于采样环节而引起误差。 1.2.2培养 掰断采样器头部后于37℃培养箱中培养至少6h。 1.2.3PCR样本处理 将已在采样管中培养好的标本混匀，然后每10份标本为1组，从每份样品采样器头部滴出2滴培养液到1.5ml离心管中，然后将1.5ml离心管放入冷冻离心机中12000rpm离心5min后弃去上清，留下沉淀，在每管中加入50mu;l DNA提取液，震荡混匀，放入干式恒温仪100℃处理5min，取出再放入冷冻离心机中12000rpm离心5min制成标本模板。 1.2.4PCR加样 从上述标本模板中各取5mu;l到PCR反应管中（深圳市生科源技术有限公司已分装好反应体系），每次上机检测分别设置阴、阳性对照管。 1.2.5PCR扩增检测 将加好样本的PCR反应管放入实时荧光PCR仪中，按照厂家试剂盒说明书设置好反应程序，进行PCR扩增。若PCR检测出阴性结果，则直接报告阴性；若PCR检测出阳性，将该组10份标本分别按照国标法进行培养和鉴定。 2 结果 2.1 对10087份标本采用PCR方法和培养法做比较，阳性率对比如表1所示。 表1 阳性率对比表 2.2表2为PCR方法结合培养法在不同性别肠道致病菌阳性检出率情况表，在不同性别的从业人员中，男性沙门氏菌、志贺氏菌的阳性率分别为0.65permil;和0.22permil;；女性的沙门氏菌和志贺氏菌的阳性率分别为1.09permil;和0.55permil;。女性两种致病菌的阳性率都比男性两种致病菌的阳性率高。 表2 不同性别致病菌阳性率对比表 3 讨论 从表1结果可以看出，实时荧光PCR检测法对沙门氏菌、志贺氏菌的检测阳性率比培养法高，但是目前确认阳性样本还是以培养法确认为准，所以采用PCR方法结合培养法对从业人员健康检查沙门菌、志贺菌可以有效的提高从业人员肠道致病菌阳性检出率，有利于防止疾病在食品经营行业盒公共场所服务行业的传播。 采用实时荧光PCR方法还可以提高检测结果的即时性。提高疾病预防控制水平。多数体检人员属于已从业人员进行例行换证工作。按