构建甲型流感病毒核蛋白融合基因三种方法的比较研究.pdfVIP

70· 史堡塞堕塑!堕压疸查堂蓥查垫!!至!旦筮!!鲞笙!塑 技术方法． 构建甲型流感病毒核蛋白融合基因 三种方法的比较研究 刘波，王宝林，陈玲，闫静，张建勇，何宏轩，张泓 【摘要】 目的 比较构建甲型流感病毒核蛋白NP融合基因的三种方法，以获取成功构建含绿 色荧光蛋白融合基因的方法。方法PCR扩增甲型流感病毒核蛋白NP基因片段，运用三种不同的 方法构建NP表达绿色荧光蛋白的融合基因：①含限制性内切酶酶切位点的NP基因片段与pEGFP— N1克隆构建融合基因；②NP基因片段与pMDl9．TVector连接、TA克隆后获得限制性内切酶酶切位 点，经pEGFP—N1克隆构建融合基因；③含限制性内切酶酶切位点的NP基因片段与pMDl9一TSimple Vector连接、TA克隆后经pEGFP—N1克隆构建融合基因。结果含限制性内切酶酶切位点的NP基 因片段TA克隆后经pEGFP—N1克隆，获得高效且稳定的绿色荧光核蛋白融合基因，第一、第二两种方 法构建绿色荧光核蛋白融合基因成功率低。结论 含限制性内切酶酶切位点的NP基因片段经TA 克隆与pEGFP—N1连接克隆，成功构建了绿色荧光蛋白的甲型流感病毒核蛋白NP融合基因pEGFP— N1一NP，该方法高效且重复性好。该研究为进一步了解NP蛋白的生物功能及甲型流感病毒的致病机 理奠定了基础。 【主题词】 流感病毒A型；核蛋白质类；绿色荧光蛋白；基因 ofthreemethodsinconstructionfusion ofinfluenzaAvirus LIU Comparison gene Nucleoprotein Bo+WANG Bao—lin，CHENLing，YANJing，ZHANGJian—yong，HEHong—xuan，ZHANGHong． of Medicine +DepartmentRespiratoryMedicine，LaboratoryofRespiratory Research，AffiliatedHospitalof Medical Zunyi 563003，China College，Zunyi author：CHEN Corresponding Ling，Email：ling]uncd@yahoo．com To abestmethodof influenzaNPfusion 【Abstract】0bjectivedevelop constructing gene enhancedfluorescent The NP ofinfluenzaA containing green protein(EGFP)．Methodsfull—lengthgene was RT·-PCRandwasinsertedintoan vector inorderto amplifiedby eukaryoticexpression pEGFP--N1 constructafusion of threedifferent methods．Methodone．NP genepEGFP-N1一NPusing genecontaining restrictionendonucleasesand wereboth thesamerestrict and pEGFP—N1 digestedusing enzymesligated， thefusion of