细胞核增殖抗原启动子调控荷载双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒的构建.pdfVIP

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2018-04-06 发布于北京
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细胞核增殖抗原启动子调控荷载双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒的构建.pdf

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·1974· ·实验研究· 细胞核增殖抗原启动子调控荷载双基因 RNA干扰的条件增殖腺病毒的构建陈仁富程伟松程乾李连涛方琳刘俊杰温儒民李望郑骏年【摘要】目的构建细胞核增殖抗原(Ki-67)启动子调控表达Ki-67基因和人端粒酶逆转录酶染293细胞，9—12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒DNA，行聚合酶链反应(PCR)鉴定。结果病片段。结论成功构建Ki-67启动子调控荷载Ki-67、hTERT双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒，为研究靶向肿瘤治疗奠定基础。【关键词】条件增殖腺病毒；细胞核增殖抗原启动子；细胞核增殖抗原基因；人端粒酶逆转录酶基因；RNA干扰。 Constructionof adenovirus cellnuclear conditionallyreplicative expressingproliferation antigen telomerasereverse siRNA稍th cellnuclear siRNA，human transcriptase proliferation antigenpro- moter CHEN regulation Lian—tao．FANGhn。UU Ren-fit‘，CHENGW西-song。CHENGQian．LI Jun-fie，WENRu—rain，LIWang，zHENGJun—nian．‘Departmentof ofXuzhou Urology．AffiliatedHospital Medical 221002．mina College．X“zhou author：zHENG Corresponding Jun—nian．Email：zhendunnian@sina．corn Toconstruct 【Abstract】Objective conditionally replicativeadenovirus(CRAds)expressingpro— liferationcellnuclear andhumantelomerasereverse antigen(Ki-67)siRNA transcriptase(hTERT)siRNA withKi-67 (1)ThehTERTsiRNA was andcloned promoterregulation．Methods sequencesynthesized into inthe siRNA．(2)Bothand siRNA pSilencer3．1．resultingplasmidpShTERT pZKi-67pZD55一Ki-67 were withXbaI／EcoR Ki-67 andthe con． V．the plasmiddigested fragmentcontainingpromoterfragment Ki-67siRNAwere inthe hTER． taining connected．resultingplasmidpZKi-67一ZD—Ki-67siRNA．(3)The TsiRNA was from siRNAandclonedinto inthe