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细菌人工染色体携带的表达FGF18-绿色荧光蛋白重组体的构建.pdf
山东医药2013年第53卷第19期
细菌人工染色体携带的表达FGFl8一绿色
荧光蛋白重组体的构建
孙德旭1，秦苏萍2，王晓天2，李小翠2，刘志强3
(1徐州医学院人体解剖学教研室，江苏徐州221004；2徐州医学院病原微生物学教研室；
3the ofTexasHealthScienceCenteratSan
University Antonio)
摘要：目的构建由细菌人工染色体(BAC)携带的表达FGFl8-绿色荧光蛋白(GFP)的重组体，用于生产转基
因小鼠，筛选表达FGFl8的特定细胞。方法分别克隆FGFl8基因启动子区域的5’同源臂和3’同源臂，插入到
BAC，转
42℃实现基因同源重组，将GFP基因插入到FGFl8基因的启动子区。结果经过氯霉素与卡那霉素的正负筛选，
转基因小鼠生产。
关键词：FGFl8；绿色荧光蛋白；细菌人工染色体；同源重组
doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．19．004
中图分类号：Q816 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2013)19-001l讲
Constructionofarecombinant队CFGFl8．GFP
expressing
sUN
De一地，Qm Xiao—tian．LIXiao—cui，LlU
Su-ping，WANG zhi·qiang
XuzhouMedwal
(1 221004，P．R．China)
College，Xuzhou
Toconstructabacteriaartificial fluorescent
Abstract：Objective chromosome(BAC)carryingFGFl8-GFP(green
the of cells FGFl8in mouse．Memods11le5’and3’homolo—
protein)for
purposescreeningtarget expressing transgenic
armofFGFl8 wasclonedPCRandinserted
gousflanking genepromoter by intothe
pBS—GFP-kanplasmid．’11leBMQ一
282D14BAC thefull ofFGFl8wasisolatedandtransformedintotheSWl05bacteria
containinglength gene electro．
using
bacteria theBACWasscreenedandtransformedwiththe
poration，thepositive containing pBS—GFP—kanplasmid．These
bacteriawererecombinedat42℃inordertoinserttheGFP intothe ofFGFl8 Afterthe
gene promoter gene．Results
andthe bacteria FG
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