绒山羊成纤维细胞生长因子5基因（FGF5）毛囊特异性表达载体的构建及转染胎儿成纤维细胞.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2014, 22(12): 1536~1543 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2014.12.008 绒山羊成纤维细胞生长因子5 基因(FGF5)毛囊特异性表达载体的构建 及转染胎儿成纤维细胞 * * 康健 胡广东 权富生 张涌 西北农林科技大学动物医学院/农业部动物生物技术重点实验室，杨凌712100 *通讯作者，quanfusheng@ ；yongzhang 摘 要 绒山羊的绒毛品质、产量与皮肤毛囊的生长发育密切相关。本研究旨在构建绒山羊(Capra hircus)成纤维细胞生长因子5 基因(fibroblast growth factor 5, FGF5) 的毛囊特异性表达载体，并证明其表 达的有效性。分别以绒山羊基因组和cDNA 为模板，利用PCR 方法克隆角蛋白关联蛋白6- 1(keratin associated protein 6- 1, KAP6-1)基因的启动子和FGF5基因的编码区序列(coding sequence, CDS)，并将这 两个元件连接到去除CMV 启动子的真核表达载体pEGFP-N 1 上，FGF5与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)基因表达框之间以猪捷申病毒(Porcineteschovirus, PTV)2A(P2A)相连，构 建毛囊特异性表达载体pEGFP-N 1-KF。表达载体转染绒山羊胎儿成纤维细胞后，对细胞表达产物进行 qRT-PCR 和Western blot 检测。酶切鉴定结果表明，载体pEGFP-N 1-KF构建成功；qRT-PCR 结果表明， FGF5正常表达；Western blot 结果显示，P2A 能够有效剪切FGF5 和EGFP 融合蛋白。表明成功得到了绒 山羊FGF5基因的毛囊特异性表达载体并在绒山羊胎儿成纤维细胞中能正常表达。本实验为进一步研 究绒山羊FGF5基因在毛囊发育和周期调控中的作用提供了技术支持。 关键词 FGF5，载体构建，胎儿成纤维细胞，绒山羊 Construction of Fibroblast Growth Factor 5 Gene (FGF5) Hair Follicle Specific Expression Vector and Transfected into Cashmere Goat (Capra hircus) Fetal Fibroblast Cells KANG Jian HU Guang-Dong QUAN Fu-Sheng* ZHANG Yong* Key Laboratory of Animal Biotechnology, Ministry of Agriculture/College of Veterinary Medicine, Northwest Agriculture and Forestry University, Yangling 712100, China * Corresponding authors, quanfusheng@; yongzhang Abstract The quality and yield of cashmere goat wool are closely related to the growth and development of skin hair follicles. This study aimed to construct an eukaryotic expression vector and prove whether it could specifically express fibroblast growth factor 5 gene (FGF5) in the hair follicles of cashmere goat (Capra hircus). The ker