铜绿假单胞菌LasR基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Prog．Bi仳h哪．Bi叩hy5． 2007：34(10) 2．4外毒素A的活性检测 (P0．01)，说明绿脓菌素的产生受到很强的抑制 表3结果显示，pucPl8菌株和标准株PAol 比较，外毒素A的活性差异没有显著性伊 O，05)，pucPl8以珊R劬㈣菌株和标准株PAol比 较，pucPl8仇s14“。菌株的外毒素A的活性被明 显抑制fPO，05)． T曲k3 0f麟。蛐At0 Su阱Ⅱ憾咖n阳te develop reactl0“ 囊～ Fi晷4Exp懈面onofpy眦ya砒n ，：c伽verIedpucPl8“啦I—s帅i_l；2：Convertedblanlcp1勰Ilm ocomp蛳dwi血PAoI，PO．05 pUCPISs吨iⅡ=JS啪dard曲inPA01， 2．5绿脓菌素的检测 2．6病理组织切片检查 图5结果显示，与标准株PA01感染的大鼠比 图4结果显示，pucPl8菌株和标准株PA01 绿脓菌素的产生水平没有娃著忡差异(PO．05)， 较，用pucPl8／f∞R“一菌株感染的大鼠，支气管 而pucPl8／lasR…菌株基奉没有产生绿脓菌素炎症明显减轻． PA The nac如n0f珀tsinfected ng．5 i硼砌atory by (a)No珊alti跚e．(b)In‰把dbyPAol(absce蜘一fh吐i明)(c)In‰忙dby咖ⅧtedpucPl8九明I—”衄i11． 3讨 论 具有级联关系问，L矗s系统在转录和转录后水平均 刘Rhl系统有调控作用．因此，严格控制LasR基因 随着对细菌Qs系统的深入研究和认识，发现 的表达，就可控制铜绿假单胞菌Qs系统信号的传 Os系统与许多致病性因素有关∞．在革兰阴性致病 递从而抑制毒力因子的表达，降低细菌的致病性． 菌中，对铜绿假单胞菌的Os系统研究较多．绎研 因此，我们在本研究中构建了LasR基冈反义核酸 究发现，铜绿假单胞菌拥有Las和Rhl2个密度感 原核表达载体在菌体中，并转化铜绿假单胞断，在 知信号系统睫lo】．Las系统由LasR基因和LasI基因 及相关基因组成，分别编码转录激活蛋白LasR和信译，降低LasR的水平，使下游毒力因子的表达受 号分子N-3一oxododecanoyl-L-homose咖e到抑制． lactone(3一 oxo-c12一HsL)合酶咀Rhl系统则包含RhlR基凶和 为了检测载体是否构建成功并转化到铜绿假单 RhlI基因及相关基因，分别编码RhlR蛋白和丁基胞菌中，本实验采用羧苄青霉素筛选阳性克隆并提 homoserinelactones， 高丝氨酸内脂(N．bu奶d 取质粒，然后经双酶切、PcR和测序鉴定证实， c4．HsU‘n～141．3一oxo—c12．HsL和c4．HsL作为信 号分子增加到一定浓度时便可分别与LasR和RhlR并转化到铜绿假单胞菌中，且目的基因方向正确． 蛋白特异性结合并激活一系列下游致病基因的表 为检测反义核酸原核表达载体 达．同时，有研究发现，2个密度感知信号系统