细胞破碎技术PPT.ppt

细胞破碎原理及动力学 按可溶性蛋白质释放的破碎动力学，则可写为： log e [Rm/(Rma - R)] = log e D = kt 若按实际测定的蛋白质量 Ro 表示， 当 Ro = Rma 时， 则 Ro = Rma + k2/k1 . K 按细胞破碎率来表示，可写成： log e (Xma/1 - X) = kt 通过对破碎细胞的球磨机的示踪研究表明，其动力学行为与连续搅拌反应器(CSTR)很相似，因此，对Dyno-mill KDL 0.6的球磨过程可以认为是由四个串联的搅拌反应器组成，即由四个搅拌叶构成一个反应器，相邻的搅动叶轮距离较小，因此，存在反流现象，而使其效率略有降低。而5 L的Dyno-mill，因反流现象可以忽略，因此破碎效率较高。 影响细胞破碎的因素及其相互关系 细胞种类及状态 利用Dyno-mill KDL进行的细胞破碎试验表明，不同中属的微生物细胞在相同条件下破碎时，其破碎效率有明显差异，如表 。 菌种 活菌数 蛋白质 酶 ? 最大破碎率(%) K (min-1) 最大释放量(mg/g.dl) K (min-1) 最大释放量 （IU/g.dl） K (min-1) 假单孢菌 - - 66.0 1.1 46.2 1.6 阴沟肠杆菌 100 1.3 99.0 1.55 70.0 1.65 大肠杆菌 100 1.75 40.5 1.7 32.0 1.4 酵母 90 1.46 54.0 1.5 45.0 1.3 影响细胞破碎的因素及其相互关系 上述差异的主要原因是不同种属的微生物细胞的大小和形态，细胞壁或膜的结构不同，另外，因生长条件如培养温度，时间，营养成份不同使上述的细胞形态细胞壁结构等也有差别。因此，即使在相同的破碎条件下其破碎效果也不同。换句话说，不同种属的微生物细胞所需的破碎条件也不相同。从大量文献中可以总结出这样的规律：按细胞破碎的难易程度是细菌＜酵母＜真菌＜藻类。 另外，细胞的保存情况也会影响破碎效果， 保存状态 破碎程度 (%) 5 (min) 10 (min) 15 (min) 喷雾干燥 55 91 97 新鲜 87 99 100 细胞浓度 在细胞破碎前，需用适当的介质，比如缓冲液按细胞重量配制成一定细胞浓度的悬浮液。悬浮液要均匀，要防止有结块和沉淀。初始的细胞浓度对破碎速率的影响如图 。 破碎速度常数(K)与酵母浓度的关系 ? 不锈钢搅拌叶， ?聚氨酯搅拌叶 细胞浓度 一级反应动力学的速成常数应当与细胞浓度无关，但在较高细胞浓度下，破碎过程细胞内含物不断释放使系统粘度不断升高，混合速度降低，导致破碎速率下降。在高细胞浓度下，最大蛋白质释放量(Rm)降低，但破碎率高。低细胞浓度下，细胞的总蛋白质释放量高，并受流出速度影响较小；高细胞浓度下，细胞的总蛋白质释放量降低，特别是在高流出速度下，总蛋白质释放量随细胞浓度增加而下降。 酵母浓度对蛋白质释放的影响 △ ▲ 不锈钢搅拌叶， ▲ ●流速为100×10-6m3/sec ○ ● 聚氨酯搅拌叶， △ ○流速为20×10-6m3/sec 细胞浓度 除了细胞浓度直接影响破碎物的粘度以外，细胞的保存状态也影响着粘度和破碎率。 细胞浓度与保存状态对粘度的影响 ◆ 鲜细胞 ■干细胞 细胞浓度 细胞破碎过程中，由于粘度增加，热传导能力降低，即使在相同的冷却条件下，破碎系统的温度也会增高，温度的增高会引起蛋白质和酶变性，使蛋白质和酶的总释放量降低。 细胞浓度对破碎温度的影响 ◆ 玻璃研磨室 ■ 不锈钢研磨室 细胞浓度 总之，在Dyno-mill上进行细胞破碎，细胞浓度从20%增加到40%，破碎速度常数仅有很小的变化;细胞浓度增加到50%，破碎速度常数减小，破碎效率降低。高细胞浓度下，还会发生细胞破碎物沉淀和蛋白质沉淀现象．一般来说，破碎细胞浓度以40%为宜。 球磨剂 最常使用的球磨剂是无铅玻璃珠，其它的还有不锈钢珠，聚酯和聚酰胺珠等。 球磨剂颗粒大小的影响 一般使用的无铅玻璃珠的直径为0.1