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第十一章 核糖体与核酶 Chapter eleven Ribosome and ribozyme 第一节 核糖体的类型与结构 核糖体是细胞内蛋白质合成的细胞器，唯一功能是按mRNA指令由氨基酸合成多肽链。 核糖体几乎存在于所有细胞,从原核细胞到真核细胞均含有大量核糖体,线粒体和叶绿体中也含核糖体,仅红细胞等少数特化细胞中没有 核糖体是一种颗粒状结构,没有被膜,主要是核糖体RNA(rRNA),占60%,核糖体蛋白(r蛋白),占40% 还有其它功能的核糖核蛋白颗粒,常是小分子RNA(snRNA)与蛋白组成的颗粒,参与RNA的加工、RNA编辑、基因表达调控等. 一、核糖体的基本类型与成分 1、基本类型 (1)70S的核糖体:由50S和30S两个亚基组成；原核细胞的核糖体,叶绿体和线粒体核糖体也接近70S (2)80S的核糖体: 由60S和40S两个亚基组成 大小两个亚基常游离于细胞质基质中,只有在合成蛋白质时才结合在一起，胎链合成完毕后，大小亚基解体，又游离于细胞质中 2、核糖体的化学组成 核糖体大小亚基都是由rRNA和核糖体蛋白组成 (1)原核细胞的70S核糖体中: 50S大亚基含33种蛋白质和两种rRNA：23S rRNA和5S rRNA。 30S小亚基含有21种蛋白质和一个16S rRNA (2)真核细胞的80S核糖体中 60S大亚基含49种蛋白质及3种rRNA：28S rRNA、5.8S rRNA和5S rRNA。 40S小亚基含33种蛋白和一种18S rRNA 二、核糖体的结构 （一）核糖体结构与功能的分析方法 ?离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； ?纯化的r蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装， 显示核糖体中r蛋白与rRNA的结构关系 ?双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶段中， 与rRNA结合的蛋白质的类型 ?双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在 结构上的相互关系 ?电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖 体的亚单位上的定位。 ?70S核糖体小亚基16S rRNA结构及与全部r蛋白关系 (二)原核细胞的核糖体结构 1、核糖体蛋白 E.coli核糖体小亚基含21种蛋白质,分别命名为S1-S21;大亚基含33种蛋白质,分别命名为L1-L33 2、核糖体rRNA E.coli小亚基含16S rRNA，共有1542个核苷酸，不同来源的16S rRNA的序列组成具保守性。含四个结构域，每个结构域都有46%碱基配对，形成螺旋的柄状结构。每个柄状结构都很短，不到8bp，且并不都是完全配对。 3、细菌核糖体模型 在该模型中确定了一些重要的功能区。如在小亚基中确定了mRNA和tRNA结合位点，并确定了催化肽键形成的位点位于大亚基。确定了小亚基中部突出的平台部分含有16S rRNA的3‘端，此部位有与mRNA结合的序列。与蛋白质合成起始相关的tRNA、蛋白质因子结合位点位于相邻小叶中。大亚基还具有催化肽键形成和GTP水解的功能区。 （三）核糖体的装配 1、rRNA的转录与加工 (1)真核生物:18S、5.8S和28S基因是串联在一起,每个基因被间隔区隔开。该基因在RNA聚合酶Ⅰ作用下，首先转录成一个45S的前rRNA，然后被加工成41S前rRNA，再被切割成20S前rRNA和32S前rRNA，20S rRNA加工为成熟的18S rRNA，32S rRNA加工为28S和5.8S rRNA 5SrRNA基因位于不同染色体上,由RNA聚合酶Ⅲ转录,仅进行简单加工或不加工 (2)原核生物:细菌中5SrRNA基因与16S和23S组成一个转录单位:16S-23S-5S 在RNA聚合酶的作用下,转录单位转录成一个rRNA前体,经核酸酶Ⅲ的切割,生成16S、23S和5.8S的前体,经其它酶进一步加工生成成熟的三种rRNA。 2、核糖体的装配 核糖体是自我装配的细胞器，当r蛋白和rRNA合成加工完成后即开始装配大小亚基。 在原核生物小亚基装配时，一些蛋白能独立地与16SrRNA结合，装配成的中间体为其它蛋白的结合提供位点。 在真核生物，45SrRNA、5SrRNA与蛋白结合形成80S颗粒，随后降解成两种颗粒，大颗粒含32S和5SrRNA，小颗粒含20SrRNA。小颗粒中20SrRNA降解成18SrRNA，大颗粒中的32S rRNA被加工成28S和5.8SrRNA,并与5S装配成大亚基 三、核糖体的功能-蛋白质的合成 在核糖体上合成的蛋白质的一级结构，即多肽链。合成是从多肽链的N端开始，到C端结束。 对于mRNA，合成的方向是5’-3’，蛋白质的合成涉及核糖体的一些功能位点和RNA作用 （一）核糖体的功能位点 原核生物有4种与RNA结合的位点，一个是与mRN