薄层色谱法操作技术控制要点分析.docVIP

精品论文 参考文献 薄层色谱法操作技术控制要点分析 安国市药品检验所 河北安国 071200 【摘 要】2015年版《中国药典》一部中，有4088项采用TLC法进行中药鉴别，可见薄层色谱法技术操作的普遍性。但很多药学人员常常会由于操作技术不够规范而导致结果的不准确性，尽管其具有操作简便、结果直观的优势。本文将对薄层色谱法操作技术控制要点进行概括分析，旨在为实际鉴别应用提供参考。 【关键词】薄层色谱法；操作技术；控制要点 【中图分类号】TF724.5【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-09-089-01 薄层色谱（Thin-layer Chromatography，TLC）法自开始作为色谱法的一个分支应用以来，以其操作简便、结果直观的优势被广泛应用于中药鉴别和分析中[1]。最为直观的证明就是在2015年版《中国药典》一部中，就有4088项采用TLC法进行中药鉴别。尽管如此，仍有许多人由于操作技术不够规范而导致结果的不准确性。本文将对薄层色谱法操作技术控制要点进行概括分析，旨在为实际鉴别应用提供参考。 1 TLC操作方法及其注意事项 TLC的操作过程主要包括五个步骤：选择薄层板、点样、展开、显色、检视与记录[2]。其中，薄层板上斑点的清晰度、分离度和重现性是判断薄层色谱效果的关键。由于薄层色谱容易受外界环境的干扰，因此，需要严格对待操作过程中的每一个步骤。 1.1选择薄层板 目前实验室多数采用市售硅胶G型薄层板或自制薄层板，前者的分离效果更优。实验操作中对薄层板的要求是厚度均匀，表面平整光滑，无麻点气泡和破损污染等。硅胶G薄层板适用于分离酸性和中性物质，因其表面pH值约为 5；分离碱性物质时可稀碱溶液自制薄层板，或用碱性展开剂展开，从而得到理想的图谱。市售薄层板保存于阴凉干燥处，可直接使用；自制薄层板使用前一般应于110℃下活化 30 min，并置干燥器中备用。不同批次的薄层板可能会影响试验的重新性，需注意。 1.2点样 点样方式主要有自动点样和手动点样两种，后者以其灵活方便的优势应用较为普遍。点样方法则包括接触式点样和喷雾点样，实验室多采用接触式点样。点样直径控制在3mm以内，边点样边用吹干溶剂。在同一原点进行多次点样时，要尽可能使每次的点样环中心重合、直径大小一致，以免形成多个环状，影响色谱图的清晰和整齐。点样时应将点样器垂直接触薄层板表面，防止损伤板面。点样量一般为0.5-10mu;l[3]，过小影响斑点清晰度，过大容易产生拖尾；样品的浓度通常为 0.5-2mg，浓度过大容易造成斑点脱尾或重叠，分离效率低。样品溶剂的选择原则是可以溶解被测成分但溶解度不是很大的溶剂。 1.3展开 展开溶剂的配制应严格按照其精确比例，并待其混合均匀后在进行使用。展开剂的加入量以薄层板放入的深度距原点5mm为宜，过多容易造成原点浸入展开剂，其成分将被展开剂溶解，而非在薄层板上分离。将点好样的薄层板放入展缸中后，需将其在展开剂的蒸气中预饱和15-30min，再进行展开。这是因为溶剂蒸汽可以和液相（即展开剂）、固定相（即吸附剂）一起构成一个三维层析过程，从而避免薄层分离中的边缘效应和产生溶剂前沿[4]。此外，值得注意的是，展开剂中溶剂的质量会对薄层色谱的分离能力产生直接影响。如果含有杂质超标、水分超标以及吸收空气中干扰气体等，均可影响分离结果。展开剂使用过后，其中的各溶剂比例已经发生了明显改变，不可再重复使用。 1.4显色 薄层板展开完成后，可直接检视展开效果或通过显色的检视。其中，显色方法主要包括三种：喷雾显色、浸渍显色和蒸气显色。喷雾显色是使用喷雾的方式将显色剂均匀喷洒于展开好的薄层板上，其技术要点在于要尽可能控制液滴的细微程度，同时还要保证薄层板各部位接收的喷雾密度一致。在喷雾显色时需要注意的是，显色剂要适量，太多则烘干时间过长，同时多余的显色剂会向下流动，导致斑点变形；太少则无法反应完全。浸渍显色则是将薄层板浸入显色剂中，其优势在于可以均匀显色，技术要点在于动作的细致和快速。薄层板显色完成后，一般需要进行扫描操作，为避免空气，水分等参与反应影响扫描效果，可在薄层板上覆盖一个大小相等的洁净玻璃板，并用胶布密封。 1.5检视与记录 为了得到准确而情绪的色谱图，应及时对薄层谱图进行检视和记录。在检视和记录时，应尽量使用相机等拍摄设备，以电子版形式保存结果。若是在紫外灯下拍摄薄层图谱，可使用滤光片滤除紫外光，以免图谱与肉眼观察间存在色差，确保记录的真实完整。 2 影响薄层色谱分析的其