药用植物生物技术实验.doc

培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等，由于每种培养基往往含有一二十种化合物，配制起来不仅繁琐，而且还很难达到准确和精确，尤其是 ... 目 录 实验一 培养基母液的制备…………………………………………………1 实验二 培养基的配制与灭菌………………………………………………6 实验三 无菌操作及种子无菌播种…………………………………………9 实验四 激素对器官分化及愈伤组织诱导的影响…………………………13 实验五 茎尖培养与脱毒……………………………………………………16 实验六 有丝分裂制片技术和显微观察……………………………………18 实验七 植物多倍体细胞的诱发与鉴定……………………………………22 实验八 植物组织总DNA的提取与测定……………………………………24 实验九 毛状根培养…………………………………………………………27 附 录………………………………………………………………………32 实验一 培养基母液的制备 一、实验目的 学习和掌握培养基母液的配制方法和注意事项。 二、实验原理 培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等，由于每种培养基往往含有一二十种化合物，配制起来不仅繁琐，而且还很难达到准确和精确，尤其是生长调节物质和微量元素用量较少，难于准确称量，稍有偏差，就会影响试验结果及试验的重复性。为解决这一问题，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。 三、实验药品和试剂 NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、（NH4）2SO4、NaH2PO4·H2O、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、Na2-EDTA·2H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(VB6)、盐酸硫胺素(VB1)、蔗糖、琼脂0.0001g）、扭力天平（感量为0.01g）、烧杯（1000ml、500ml、100ml、50ml）、量筒（500ml、25ml）、容量瓶（1000ml、500ml、100ml）、试剂瓶（1000ml、500ml、100ml）、药勺、玻棒、电炉、石棉网。 五、实验方法与步骤 按组分别配制MS、B5培养基1、大量元素母液的配制（母液1） 各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍，扭力天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。倒入试剂瓶，贴好标签，注明每配1L培养基需取此液100ml。保存于冰箱中。 表1 MS培养基大量元素母液制备（母液1） 序号 药品名称 培养基浓度（mg/L） 扩大10倍称量(mg) 1 NH4NO3 1650 16500 蒸馏水定容至1000ml 2 KNO3 1900 19000 3 CaCl2·2H2O 440 4400 4 MgSO4·7H2O 370 3700 5 KH2PO4 170 1700 注意：配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg2十H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。 2、微量元素母液的配制（母液2、3） MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除铁）组成。微量元素用量较少，特别是CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O，因此在配制中分母液2、3配制。按照表2，表3配方，用感量为0.0001g的电光分析天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取母液2为10ml，母液3为5ml。 表2 MS培养基微量Ⅰ的配制（母液2） 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大50倍称量(mg) 1 MnSO4·4H2O 22.3 1115 蒸馏水定容至500ml 2 ZnSO4·7H2O 8.6 430 3 H3BO3 6.2 310 4 KI 0.83 41.5 5 Na2MoO4·2H2O 0.25 12.5 表3 MS培养基微量Ⅱ的配制（母液3） 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大100倍称量(mg) 1 CuSO4·5H2O? 0.025 2.5 蒸馏水定容至500ml 2 CoCl2·6H2O?? 0.025 2.5 3