dna甲基化在氡致beas2b细胞恶性转化过程中作用word格式论文.docxVIP

中文摘要DNA 甲基化在氡致 BEAS-2B 细胞恶性转化过程中的作用及传代代数的增加，细胞形态学及生长趋于稳定，表现出类似癌细胞的生长特性。细胞周期显示 G1 期明显缩短，S 期明显延长，细胞传代后凋亡率均比染氡初期明 显降低，染氡后细胞线粒体膜电位降低，表明细胞处于增殖旺盛状态，其周期发 生一定程度的失控，同时细胞凋亡率明显降低，呈现凋亡抑制状态。（2）细胞恶 性程度改变：与对照组相比，染氡 10 代细胞软琼脂克隆形成能力已明显增强，染氡 30 代传代至 40 代的细胞软琼脂克隆形成率已达到 27.27±1.10％（P0.05）；裸 鼠成瘤实验表明染氡 30 代且传代 40 代的 BEAS-2B 细胞已具有体外裸鼠成瘤能力， 与对照组细胞相比，Rn30-40 细胞体外种植裸鼠成瘤率达到 30％（P0.05）。分离 肿块做病理分析可见瘤细胞大小不一，呈弥漫性分布，为低分化癌，对照组裸鼠 肿块病理分析未见异型性明显的肿瘤细胞。DNMT3A 基因在各染氡代细胞传至 40 代时表达均明显升高。除 Rn1-20，Rn10-20 外，其余各染氡代细胞 DNMT1 基因 表达明显降低。（3）甲基化状态改变：对 MGMT、ERCC1、XRCC1、RARβ 及 LINE-1 甲基化状态进行检测，发现 MGMT 和 RARβ 基因在染氡组细胞中均发生了 DNA 甲基化修饰，而 ERCC1 和 XRCC1 基因在染氡组细胞中均未发生 DNA 甲基化修 饰，LINE-1 基因在对照组细胞中呈现高甲基化状态，而在 Rn30-40 组细胞中呈现 低甲基化状态。对 MGMT 和 RARβ 基因 mRNA 表达情况进行检测，与对照组相 比，染氡组细胞 mRNA 表达均降低，差异有统计学意义。（P0.05）。结论：1.建立并确认了体外染氡诱发 BEAS-2B 细胞恶性转化模型，且细胞恶性程度 随染氡代数和传代代数的增加呈现剂量效应关系，细胞出现移植成瘤。2. 细胞恶性转化过程中，DNA 甲基化转移酶基因表达发生了改变，同时出现 MGMT，RARβ 基因高甲基化，LINE-1 基因低甲基化，这些可能是氡染毒致 BEAS-2B 细胞恶性转化的机制。关键词：氡，肺癌，DNA 甲基化，细胞恶性转化，基因表达作者：韦晔 指导教师：李建祥 副教授DNA 甲基化在氡致 BEAS-2B 细胞恶性转化过程中的作用英文摘要Effects of DNA methylation in malignant transformation of BEAS-2B cells induced by RadonAbstractObjective:To investigate the mechanisms of lung cancer caused by radon, BEAS-2B cells were induced to malignant transformation by radon in vitro to establish a cell model of lung cancer and gene expression of DNMTs, DNA methylation status of tumor suppressor genes were detected.Methods:The immortalized human bronchial epithelial cells (BEAS-2B) in exponential growth phase were planted onto Transwell membrane with 1.5×105 per well. After adherence, cells were directly exposed to radon with oxygen concentration of 21% andtemperature at 37℃.Three transwell membrane were exposed to radonsimultaneously .The optimal time and concentration for inducing the malignant transformation of BEAS-2B cells were determined by CCK-8 assay. After the exposure, cells were cultured until to 30 passages. The exposed cells were trypsinized into dishes for further growth to 40 passages. Biological characterist