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EGFL7通过上皮-间质转化促进胰腺癌侵袭的实验研究中文摘要第一部分EGFL7在人胰腺癌细胞株中的表达目的研究Patu8988、PANC-1、BxPC-3、Capan-1胰腺癌细胞EGFL7的表达状况，为后续研究做好准备。方法常规培养Patu8988、PANC-1、BxPC-3、Capan-1胰腺癌细胞，Real-time PCR、Western blot方法检测EGFL7 mRNA和蛋白的表达。结果Real-time PCR显示上述4株胰腺癌细胞中EGFL7 mRNA相对量分别为：1.73±0.15、2.26±0.20、1.53±0.10、1.00±0.10，差异有统计学意义（P0.05）。Westernblot显示上述4株胰腺癌细胞中EGFL7蛋白相对量分别为：0.26±0.03、0.32±0.04、0.23±0.02、0.15±0.02，差异有统计学意义（P0.05），其中PACN-1细胞的EGFL7表达量最高。结论在Patu8988、PANC-1、BxPC-3、Capan-1胰腺癌细胞中，PANC-1细胞EGFL7表达量最高。第二部分靶向EGFL7的siRNA干扰质粒的构建与筛选目的构建并筛选靶向EGFL7沉默效果最佳的siRNA干扰质粒。方法根据GenBank中EGFL7的基因序列，设计4条靶向人EGFL7的siRNA序列，与干扰载体共转染PANC-1细胞，Real-time PCR、Western blot筛选出最佳干扰序列。结果靶向EGFL7基因重组siRNA干扰质粒构建成功，并能有效抑制EGFL7的表达，且EGFL7-siRNA-1效果最佳。结论EGFL7-siRNA-1干扰质粒对PANC-1细胞EGFL7的沉默效果最佳。第三部分EGFL7对胰腺癌PANC-1细胞侵袭的影响及机制探讨.目的研究EGFL7靶向沉默后人胰腺癌PANC-1细胞侵袭能力的改变，及EMT相关标志物表达的改变。方法实验细胞分为PANC-1（空白对照组）、NC-PANC-1（阴性对照组）、si-PANC-1（实验组）三组。各组细胞连续培养120h，分别在转染24h、48h、72h、96h、120h后MTT法检测增殖活性。转染后72h，Transwell检测各组细胞的侵袭能力。Real-timePCR、Western blot检测E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin mRNA和蛋白的表达。结果MTT实验显示，转染24h、48h、72h、96h、120h后3组细胞的增殖活性差异无统计学意义（P0.05）。Transwell侵袭实验显示，转染后72小时3组的侵袭细胞数分别为79±5.0、70.2±4.0、30±2.5，差异有统计学意义（P0.05）。Real-timePCR和Westernblot显示：si-PANC-1组E-CadherinmRNA及蛋白较其他两组显著升高(P0.05)，而N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin较其他两组显著降低(P0.05)；NC-PANC-1组与PANC-1组间E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、VimentinmRNA及蛋白差异无统计学意义(P0.05)。结论EGFL7可通过EMT过程促进胰腺癌的侵袭。关键词：胰腺癌；EGFL7；上皮-间质转化；E-Cadherin作者：王运良指导教师：李德春教授EGFL7Promotes theInvasionandMetastasis of PancreaticCarcinomabyModulatingEpithelial-mesenchymalTransition(EMT)AbstractPartITheexpressionofEGFL7infourhumanpancreaticcancercelllinesObjectiveToinvestigatetheexpressionofEGFL7inPatu8988,PANC-1,BxPC-3,Capan-1andlaythefoundationfor follow-upstudy.MethodsFourdifferentpancreaticcancercelllinesatu8988,PANC-1,BxPC-3,Capan-1werecultured. DetectiontheexpressionofEGFL7inthosecell linesaboveusingRealtime-polymerasechainreaction(PCR)andWesternblot.ResultsReal-timePCRanalysisshowedthatthemRNAexpressionofthe4pancreat