动物细胞培养和核移植技术(上课用)111PPT.pptVIP

动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养技术 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 生产单克隆抗体技术 ----基础 一、动物细胞培养 （一）概念P44： 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 （二）原理： 细胞增殖 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 单个细胞 胰蛋白酶 （三）动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 1、选材： 优点：细胞分化程度低，分裂能力强， 容易培养。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 单个细胞 3、动物细胞生长特点： 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 ①细胞贴壁： ②接触抑制： 胰蛋白酶 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 单个细胞 4、原代培养： 消化后的初次培养（分瓶前）或10代以前的培养。 5、传代培养： 分瓶后的培养。 胰蛋白酶 传代培养的细胞一般传至10代就不易传下去 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 50代细胞 单个细胞 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到50代左右，其遗传物质没有发生变化,这种传代细胞称为细胞株。 6、细胞株：10-50代 遗传物质未变 胰蛋白酶 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 50代细胞 单个细胞 传到50代左右后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可无限制的传代下去，称为细胞系。 7、细胞系： 遗传物质未变 遗传物质已变，细胞发生癌变，获得不死性，失去接触抑制 胰蛋白酶 注：动物细胞培养不能最终培养成生物体 原代培养 传代培养 目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 二、动物细胞培养条件 1、无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理 在培养液中添加一定量的抗生素 定期更换培养液 2、营养（液体培养基） 有机物：葡萄糖、氨基酸、促生长因子 无机物：无机盐、微量元素 天然成分：血清、血浆。 二、动物细胞培养条件 CO2：维持培养液的PH 3、温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2~7.4 4、气体环境： （95%空气和5% CO2 ） O2：细胞代谢所必需的 三、动物细胞培养的应用(P47) 4、用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等 1、生产生物制品（细胞产物），如蛋白质生物制品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 2、应用于基因工程，动物细胞是基因工程技术中常见的受体细胞 3、获得细胞用于检测有毒物质 四、植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基状态 培养基特有成分 培养结果 培养目的 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 促生长因子 植物体或 细胞产品 获得细胞或细胞分泌蛋白 细胞株、细胞系 或细胞产品 快速繁殖、培育无病毒植株 再见