白蚁肠道元基因组来源β-葡萄糖苷酶bgl2 bgl15和bgl17的酶学性质研究-enzymatic properties of β -glucosidase bgl2 bgl15 and bgl17 from termite intestinal metagenome.docxVIP

A Thesis Submitted in Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of ScienceCharacterization of β-glucosidase bgl 2, bgl 15 and bgl 17from metagenome of termite gutSubmitted by Liu Xiaojing Supervised byLi Muwang Wang QianJiangsu University of Science and TechnologyJune, 2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声 明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。 (2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要随着化石能源的日益枯竭，能源问题成为当今社会所面临的主要问题之一。木质 纤维素是太阳能重要的活体贮存形式，是地球上数量最大的一种可再生资源，利用木 质纤维素生产乙醇等生物能源，不仅可以将废弃材料再利用，而且能够部分缓解日益 增长的能源需求。寻找和开发具有高活力、高稳定性、耐高温等纤维素酶具有重要的 工业应用价值。此外，纤维素酶也广泛应用于食品加工、纺织、动物饲料、造纸等各 个领域。在利用纤维素酶水解纤维素的过程中，β-葡萄糖苷酶可作用于寡糖链催化生 成葡萄糖，是纤维素降解过程中的限速步骤，因此，开发和研究新型 β-葡萄糖苷酶具 有重要的意义。白蚁主要以木质纤维素为食，能够高效的对木质纤维素进行降解。研究表明，白 蚁肠道中存在大量的共生微生物，在纤维素降解过程中起着至关重要的作用，是寻找 木质纤维素降解酶的重要资源。随着分子生物技术的不断进步，元基因组技术成为木 质纤维素酶挖掘的有效工具。本文对短角球白蚁（Globitermes brachycerastes）的肠道元基因组文库中筛选得到 的三个新型 β-葡萄糖苷酶基因 bgl 2、bgl 15、bgl 17 分别进行了克隆和异源表达，并 且对它们酶学性质进行了研究。在这三种 β-葡萄糖苷酶中，Bgl 17 属于糖基水解酶第 一家族（GHF1），分子量为 55 kD，该酶对特异性底物 4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（pNPG）的最适反应温度为 70 ℃，最适 pH 值为 5.0。在最适反应条件下，该酶以 pNPG 为底物的比活力为 115.69 U/mg。以同样底物测得其动力学参数 Km 和 Vmax 分别 为 0.81 mmol/L 和 227.27 μmol/(ml?min)。Bgl 2 和 Bgl 15 属于糖基水解酶第三家族（GHF3），分子量分别为 110 kD 和 90 kD，以 pNPG 为底物的最适反应温度分别为 40 ℃和 45 ℃。Bgl 2 的最适 pH 为 4.5，Bgl 15 具有较宽的 pH 容忍性，在最适温度 下，在 pH 5.0 至 pH 9.0 之间活性均可以维持在最高水平。同样以 pNPG 为底物时，在 各自的最适反应条件下，Bgl 2 和 Bgl 15 的比活力分别为 21.7 U/mg 和 2.33 U/mg。以上研究表明，通过元基因组筛选得到的三个 β-葡萄糖苷酶各自具有不同的特性， 能够适应不同的温度和酸碱条件，具有一定的工业应用潜力。此外，Bgl 17 的最适温 度远高于白蚁生存环境温度，为研究白蚁降解纤维素机理提供了参考。关键词：短角球白蚁肠道；元基因组；β-葡萄糖苷酶；酶学特性IAbstractWith the increasing depletion of fossil fuels, the energy issue has become one of the major problems of facing society. Lignocellulose is an important storage form of solar energy and is the most abundant r