磁刺激通过pea-15对星形胶质细胞迁移的 影响及机制-effect and mechanism of magnetic stimulation on astrocyte migration through pea - 15.docxVIP
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- 2018-07-05 发布于上海
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磁刺激通过pea-15对星形胶质细胞迁移的 影响及机制-effect and mechanism of magnetic stimulation on astrocyte migration through pea - 15
万方数据万方数据原创性声明本人郑重声明:所提交的学位论文,是本人在导师的细心指导下,独立进 行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他 个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人 和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者: 日期: 年 月 日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者: 日期: 年 月 日摘 摘 要磁刺激通过 PEA-15 对星形胶质细胞迁移的影响及机制硕士研究生:赵玉敏 导师:李 哲 主任医师郑州大学第五附属医院康复科 河南郑州 450052摘 要背景及目的星形胶质细胞磷酸化蛋白 PEA-15 ( Phosphoprotein enriched in astrocytes-15kDa)广泛存在于细胞质,位于常染色体 Iq21-22,其含有一个 DED 结构域(death effector domain,DED)---死亡效应区,抑制细胞凋亡。ERK1/2(Extracellular signal-regulated kinases)参与细胞增殖、存活和细胞迁移等多种 细胞进程。磁刺激可通过激活 ERK 通路,促进星形胶质细胞的迁移,并对中枢 神经损伤后的炎症反应等起到重要的神经保护作用。PEA-15 通过结合 ERK1/2 阻止其在细胞核中聚集,调控 EKR1/2 功能,其与磁刺激对星形胶质细胞的迁 移作用密切相关。本研究主要是在体外实验中观察磁刺激是否可通过调节 PEA-15 影响 ERK1/2 通路,调控星形胶质细胞的迁移作用,并探讨其作用机制。资料与方法.星形胶质细胞的提取、培养、细胞免疫荧光鉴定:解剖新生 1-3 天 SD(Sprague-Dawley)大鼠获取大脑皮质组织,运用差速贴壁技术分离培养,获 取星形胶质细胞,并观察其形态及生长,然后应用免疫荧光技术鉴定 GFAP 蛋白 的表达。.实验分组:体外划痕试验,根据不同的磁刺激强度将实验分为 3 组:①I对照组(不给予磁刺激,但细胞同其他刺激组置于同一环境中);②A 组(给予30%最大磁刺激强度);③B 组(给予 60%最大磁刺激强度)。3.干扰 PEA-15 表达后划痕试验实验分组:①A 组(不给予磁刺激,进行阴 形 siRNA 转染);②B 组(不给予磁刺激,但对细胞进行 PEA-15 siRNA 转染, 干扰 PEA-15 表达);③C 组(给予磁刺激,进行阴性 siRNA 转染);④D 组(给 予磁刺激,同时进行 siRNA 转染,干扰 PEA-15 表达)。观察划痕愈合情况,并 运用 Western Blot 观察 PEA-15 及其蛋白磷酸化的表达变化。利用荧光测定转 染效率;Western Blot 半定量测定干扰效果。结果1.从新生 1-3 天大鼠脑皮质中提取,经差速贴壁分离、培养的星形胶质细胞, 细胞免疫荧光鉴定胶质纤维酸性蛋白 GFAP 表达阳性,DAPI 染核测定细胞纯度 较高。2.在体外划痕实验中发现,随着磁刺激强度的增加,划痕面积愈合越快, 在 30%-60%最大磁刺激强度的强度下,星形胶质细胞迁移速度和强度呈正相关, 与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。3.通过细胞转染荧光提示该转染试剂具有较高的转染效率,对转染细胞进 行 PEA-15 蛋白的测定,Western Blot 结果提示 siRNA270 具有最佳的干扰效果。 划痕实验中转染组与磁刺激组均较正常组迁移明显。磁刺激组的 P-PEA-15 增加 明显。结论1.差速贴壁结合摇床方法可培养纯度较高的高星形胶质细胞。2.体外划痕实验中,在磁刺激 30%-60%的强度下可明显促进星形胶质细胞 的迁移。3.干扰 PEA-15 的表达后可明显促进星形胶质细胞迁移,磁刺激后可能通过 磷酸化 PEA-15 而促进星形胶质细胞迁移。关键词:磁刺激 星形胶质细胞 PEA-15 siRNAIIAbstractAbstractThe Effects and Mechanism of Magnetic Stimulation on Astrocytes Migration by PEA-15Postgradute: YuMin Zhao Supervi
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