固本健脑法对ad大鼠模型的作用及其机制分析-effect and mechanism analysis of the method of strengthening brain by consolidating constitution on ad rat model.docxVIP

中文摘要目的随着社会人口的快速老龄化，阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease， AD）因其高患病率及对社会、家庭的影响日益受到广泛重视。因此，全世 界均意识到加强研究 AD 的病因与发病机制，以及开发有效的防治措施和 药物的重要意义。本研究深入探讨固本健脑法治疗 AD 的作用机理，阐释 固本健脑治则治法理论的科学内涵，为寻求中医改善学习记忆、治疗 AD 的方药提供依据，丰富中医固本理论及中医防治 AD 理论的内容。方法1.理论研究：采用文献研究方法，系统回顾中医学从先后天之本认识 老年性痴呆的理论，结合团队相关研究成果入手，系统阐述固本健脑法治 则治法理论。2.实验研究：围绕 tau 蛋白过度磷酸化损伤是 AD 发病的核心机制， 以抑制 tau 蛋白过度磷酸化、保护树突棘的信号传导功能为靶点，选用安 理申作为西药对照，运用固本健脑法对 AD 大鼠模型进行干预，观察其对 AD 模型的作用并探讨其作用机制。取 12 月龄 SPF 级 Wistar 大鼠 70 只，雌雄各半。适应性喂养 1w 后， 随机分为 7 组，分别为正常组、空白对照组、模型组、固本健脑液高剂量组（简称固高组）、固中组、固低组和安理申组，每组 10 只。正常组不予 处理。模型组和各治疗组给予双侧海马脑立体定位注射 5μg/μl 浓度的 Aβ1-42 复制 AD 模型，空白对照组注射等位点等剂量生理盐水。3d 后，各 治疗组分别按照 10ml/kg·d 给予相应药物浓度的固本健脑液和安理申混 悬液灌胃，模型组与空白对照组则按照相同剂量给予生理盐水灌胃，连续 4w。灌胃结束后，对各组大鼠分别进行水迷宫定位航行实验和空间探索实 验，观察固本健脑法对 AD 大鼠模型行为学的影响。高尔基染色法观察各 组大鼠海马神经元树突棘形态变化及密度改变。RT-PCR 法检测各组大鼠 海马 EphB2、PARP-1 水平变化。Western Blot 法检测各组大鼠海马总 tau、IIIIIP-tau（Ser199，Ser396，Thr231 位点）、EphB2、PARP-1 表达变化。观察固本健脑法对 AD 大鼠模型学习记忆能力、树突棘形态及 tau 蛋白过度磷 酸化的作用，以探讨其防治 AD 的作用机制。结果1.固本健脑法对 AD 大鼠模型行为学的影响 定位航行实验中，模型组大鼠找到水下隐匿平台潜伏期明显长于正常组（P＜0.01），各治疗组潜伏期明显短于模型组（P＜0.01），且固高组、 固中组潜伏期短于安理申组（P＜0.01）；目标象限游泳时间百分比比较， 模型组明显低于正常组（P＜0.01），各治疗组明显高于模型组（P＜0.01）， 且固中组高于安理申组（P＜0.05）。空间探索实验中，模型组大鼠找到原 平台潜伏期明显长于正常组（P＜0.01），各治疗组潜伏期明显短于模型组（P＜0.01），且固高组、固中组潜伏期短于安理申组（P＜0.05）；模型组 大鼠穿越原平台位置次数明显少于正常组（P＜0.01），各治疗组潜伏期明 显多于模型组（P＜0.01），且固高组、固中组多于安理申组（P＜0.01）； 目标象限游泳时间百分比比较，模型组明显低于正常组（P＜0.01），各治 疗组明显高于模型组（P＜0.01），且固高组、固中组高于安理申组（P＜ 0.05）。表明本研究的 AD 模型是成功的，固本健脑法能明显改善 AD 模型 大鼠的学习记忆功能。2.固本健脑法对 AD 大鼠模型海马神经元树突棘的影响 比较各组大鼠的神经元形态学发现，模型组大鼠海马区神经元树突棘密度明显低于正常组（P＜0.01），各治疗组树突棘密度明显高于模型组（P＜0.01），且固高组、固中组均高于安理申组（P＜0.01）。表明固本健脑 法能明显改善 AD 大鼠海马神经元树突棘的形态。3.固本健脑法对 AD 大鼠模型海马区 P-tau 的影响Western blot 法检测各组大鼠海马 tau、P-tau 并比较 P-tau 水平， 结果模型组大鼠较正常组明显升高（P＜0.01），各治疗组明显低于模型组（P＜0.01），且固高组、固中组均低于安理申组（P＜0.01）。 4.固本健脑法对 AD 大鼠模型海马 EphB2 表达的影响IIIIIIWestern blot 与 RT-PCR 法检测均显示：模型组大鼠海马 EphB2 表达较正常组明显降低（P＜0.01），各治疗组大鼠海马 EphB2 表达明显高于模 型组（P＜0.01），且固高组、固中组大鼠海马 EphB2 表达均高于安理申组（P＜0.05）。5.固本健脑法对 AD 大鼠模型海马 PARP-1 表达的影响Western blot 与 RT-PCR 法结果均显示：模型组大鼠海马 PARP-1 表 达较正常组明显升高（P＜0.01），各治疗组大鼠海马 P