胶体金法和化学发光免疫法联合检测血清β―HCG以及假阳性分析.docVIP

胶体金法和化学发光免疫法联合检测血清β―HCG以及假阳性分析 　　【摘要】目的：联合应用胶体金和化学发光免疫法检测门诊妇产科1000例病人血清β-HCG，减少重复检测高浓度β-HCG（结果gt;1000mIU/mL）的现象，同时对胶体金检测假阳性结果分析。方法： 对要求定量检测血清β-HCG的病人，先用胶体金法检测其血清进行初筛，胶体金检测为阴性和弱阳性的标本，在化学发光仪上用原倍血清（仪器编码设置为151）检测，强阳性标本仪器用稀释（仪器编码设置为152）检测。结果： 两种方法结果基本一致，440例法学发光仪器检测阴性标本只记录有3例血清胶体金初筛为弱阳性。结论：联合应用俩种方法可以大大降低成本，减少重复检测的次数，但也有极少数不符的现象。如出现俩结果不符合，初筛弱阳性，上发光仪复查结果阴性表明可能是与其他含有α链亚基激素交叉反应或其他无活性的HCG分子（如游离β亚单位和β-核心片段）时引起的干扰现象。 　　【关键词】 胶体金法 ;化学发光免疫法 ;人绒毛膜促性腺激素; 弱阳性 　　 人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）是受精卵着床后由胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，分子量为3868.8u，结构中包括β链和α链2条非共价结合的亚基。α链亚基与黄体生成素（LH）、促卵泡成熟激素（FSH）、促甲状腺成熟激素（TSH）的α链亚基相类似，能与这些激素产生交叉免疫反应[1]。β链亚基与这些激素则有较大差异，交叉免疫反应很小，为免疫学检测HCG的靶位[2]。可比较精确的反映β-HCG在血中的浓度。β-HCG检测可以诊断早孕，滋养层细胞肿瘤的诊断、疗效观察和预后判断，诊断宫外孕，先兆流产的处理依据，不全流产的鉴别诊断，诊断异位HCG肿瘤，生育研究等。因此准确及时的报告β-HCG结果对临床判断一些急诊病例非常必要。由于贝克曼库尔特全自动化学发光仪在检测结果lt;1000mIU/mL 时用原倍（仪器编码设置为151）检测，gt;1000mIU/mL时必须要用稀释方法（仪器编码设置为152）检测。如冒然用编码151检测，势必造成检测重复，浪费人力物力，延迟了出报告的时间，严重时会耽误病人病情的分析。本文就本院1000例门诊妇产科病人血清分析，联合应用两种方法，节约成本，提高效率，并对3例血清胶体金初筛弱阳性发光仪阴性的血清标本做出总结讨论。 　　1.原理 　　胶体金试纸条由抗-β人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体分别固相于硝酸纤维膜和胶体金标记的抗-α人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体（固相）制成。化学发光免疫法检测原理是根据微粒子酶促化学发光，将抗体结合在特定纳米材料上，采用双抗体夹心法，以金刚烷AMPPD为标记底物，在碱性磷酸酶（ALP）的催化下，AMPPD分解成AMP-D，释放出的化学能转化为光信号而发光，发光信号的强度与ALP成正比，检测信号的强度即可达到定量分析的目的。 　　2. 材料与方法 　　2.1 标本 本院1000例门诊妇产科病人血清，无溶血、黄疸等现象。 　　2.2 仪器与试剂 贝克曼库尔特公司生产DXI 800化学发光免疫分析仪，试剂盒与校准品皆为美国原装进口试剂，质控品为英国朗道实验室有限公司生产的免疫多项检测用质控品。胶体金试纸条为蓝十字生物药业（北京）有限公司生产的蓝梦孕知早早孕检测试纸条。试剂、校准品和质控品均在有效期内。 　　2.3 方法 　　2.3.1用分离胶试管采取病人血液3ml，待血液凝固后用3000r/min离心10min分离出病人血清待用。 　　2.3.2室温下将胶体金试纸条有箭头的一端插入血清中，5秒钟后取出平放，5分钟内观察显示结果。测试纸插入血清深度不可超过MAX标志线，阳性对照线必须明显。在检测线位置（T）以及对照线位置（C）各出现一条红色反应线，提示阳性，仅在对照线位置（C）出现一条红色反应线提示为阴性。 　　2.3.3如果胶体金初筛结果为阴性和弱阳性，用贝克曼库尔特全自动化学发光仪上的编码151检测，强阳性就用编码152检测。 　　3.结果 　　对本院1000例门诊妇产科病人血清用两种方法检测，其中阳性结果标本560例，阴性结果标本440例，有3例胶体金检测假弱阳性结果，后用化学发光仪检测为阴性。三例病人经询问未用任何药物。两种方法结果如表1： 　　 表1 　　阳性 　　阴性 　　合计 　　化学发光法 　　560 　　440 　　1000 　　蓝梦早早孕试纸条 　　 563 　　 437 　　 1000 　　4 . 讨论 　　化学发光免疫法是一种具有高灵敏度、高精密度和高特异性的免疫法[3]，贝克曼库尔特公司生产的DXI 800因此具有高特异性、高灵敏性、高准确性、高稳定性、检测速度快