四种植物提取物抑制streptococcus mutans ldh活性 清除自由基作用研究-study on the free radical scavenging effect of four plant extracts on the activity of streptocus muteans ldh.docxVIP

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。，保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在以上方框内打“√”）作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的天然植物提取物在口腔疾病防治领域应用的研究已引起越来越多的关注，近十年来我们课题组一直从多角度进行有关柠檬精油(lemonessentialoil,LEO)等天然植物提取物的防龋研究；柠檬烯(limonene,LIM)为LEO的主要成分；橙皮苷(hesperidin,HPN)也是柠檬提取物(Lemonpeelextract,LPE)中的成分，在柠檬精油中含量较低；茶多酚(Tea-Polyphenols,TP)是公认的一类有防龋功效的天然植物提取物。口腔疾病主要分为硬组织损伤和软组织损伤两大类，其中硬组织损伤主要为龋病，变形链球菌(Streptococcusmutans,S.mutans)中的乳酸脱氢酶(Lacticdehydrogenase,LDH)利用碳水化合物代谢产酸，从而引起菌斑内局部pH的降低，造成牙釉质的局部脱矿，龋损形成；在软组织疾病研究方面，有大量文献报道，口腔组织内过多的自由基可引起牙周病的发生，清除局部增加的氧自由基可促进口腔溃疡愈合，促进颌面部损伤创口的愈合。本实验对比研究TP、HPN、LEO及其主要成分LIM对变形链球菌乳酸脱氢酶活力和产酸的抑制作用；研究其对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-trinitrobenzenehydrazine,DPPH·)和羟基自由基(hydroxylradical,·OH)的清除能力，进一步探讨柠檬提取物在口腔疾病防治中可能的作用机制，为今后开发天然、无毒副作用、新型的生态口腔疾病防治制剂提供理论依据。方法1.测定四种天然植物提取物对S.mutansLDH活性的影响选取S.mutansUA159为实验菌株。首先测定LEO、HPN、LIM、TP对S.mutans的最小抑菌浓度(Minimalinhibitoryconcentration,MIC)。选取MIC浓度下三个浓度作为实验浓度，空白对照组为不加任何药物的BHI液体培养基，采用还原性辅酶Ⅰ氧化法测定四种天然植物提取物对S.mutansLDH活性的影响。2.测定四种天然植物提取物对S.mutans代谢产酸的影响用FE20实验室pH计测定用药前后培养液中pH值的变化（△pH=初始pH值－终末pH值），以检测四种天然植物提取物对S.mutans产酸能力的抑制作用，并对LDH活性和产酸能力做相关性分析。3.测定四种天然植物提取物对自由基的清除作用I选取四种天然植物提取物MIC以下三个浓度组作为实验组，采用UV－Vis光谱分析方法，测定TP、HPN、LEO及其主要成分LIM对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除能力。4.采用SPSS17.0软件，将数据输入并进行分析，各组总体均数间的比较应用单因素方差分析(ANOVA)；采用Student-Newman-Keuls检验对各样本组间均数进行两两比较；P0.05定义为差异具有统计学意义。结果1.LEO、HPN、LIM、TP对S.mutans的MIC分别为4.5mg/ml、8mg/ml、23mg/ml、4mg/ml。2.LEO[2.25mg/ml(1/2MIC)~0.563mg/ml(1/8MIC)]、HPN[4mg/ml(1/2MIC)~1mg/ml(1/8MIC)]、LIM[11.5mg/ml(1/2MIC)~2.875mg/ml(1/8MIC)]和TP[2mg/ml(1/2MIC)~0.5mg/ml(1/8MIC)]，对S.mutansLDH活性和产酸均有抑制作用，与空白对照组比较，差异有统计学意义（酶活性：FLEO=105.186，P0.05；FHPN=34.522，P0.05；FLIM=31.40，P0.05；FTP=28.209，P0.05；产酸：FLEO=162.05，P0.05；FHPN=24.003，P0.05；FLIM=73.945，P0.05；FTP=32.006，P0.05），并随实验溶液浓度升高，作用能力增