蚀木链霉菌耐热内切纤维素酶基因克隆及其在大肠杆菌中表达-cloning and expression of thermostable endocellulase gene from streptomyces saprophyticus in e.coli..docxVIP
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- 2018-08-01 发布于上海
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蚀木链霉菌耐热内切纤维素酶基因克隆及其在大肠杆菌中表达-cloning and expression of thermostable endocellulase gene from streptomyces saprophyticus in e.coli.
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蚀木链霉菌耐热内切纤维素酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
蚀木链霉菌耐热内切纤维素酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
河北农业大学硕士学位(毕业)论文
河北农业大学硕士学位(毕业)论文
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1 引 言
1.1 纤维素概述
1.1.1 纤维素的结构及构成
纤维素是地球上最丰富的可再生性资源,地球上每年大约产生这类有机物2000 亿吨[1],但同时又是数量最大的一类环境污染物,如果充分利用和降解纤维素,对于 解决影响可持续发展的粮食生产,环境污染,能源危机等几个方面的问题,起着重要 的作用[2]。
纤维素是一种无水葡萄糖的线性多聚体分子,其重复单位称纤维二糖,是植物 细胞壁的主要组分之一,它的主要功能是增强细胞壁的机械支撑强度、维持不透水性 能及抗逆性[3]。一般情况下,天然纤维素和其他结构多聚物基质共同构成植物的结构 主体(植物干重的35%-50%是纤维素,20-35%为半纤维素,还有5-30%的木质素,少 数组织还几乎由纯纤维素构成。除了植物外,纤维素还存在于被囊类动物(tunicates) 和少数细菌中[4]。
从目前的认识来看,天然合成的纤维素是由葡萄糖糖基长链构成的独立的分子, 这些分子在生物合成部位发生自组装。大约30个独立的纤维素分子组装成大的结构单 位——初级纤维(或原纤维),在此基础上包装成更大的结构单位——微纤维,最后由 微纤维组装成我们熟知的纤维素纤维。在此基础上组装成诸如细胞壁、纤维质、表皮 等超结构。
纤维素各个分子包装得非常紧密,酶等大分子不能渗透,水等小分子也不能渗 透。纤维素有另一个重要特点是结构晶体化,晶体化结构的分布是离散的,距离不等。 统计学上,纤维素的结构是连续的,从完全晶体状态到完全无定形状态,中间存在各 种中间层次的结构。除了上面的两种结构之外,纤维素纤维还有多样的不规则性,像 微纤维存在扭曲和打结等。各种用于研究纤维素水解和微生物利用的纤维素材料在精 细结构上相当不同,经去除木质素而制造的综合纤维素含有丰富的半纤维素;微晶纤 维素(Avicel)在制造过程中去掉了半纤维素和纤维素的无定形结构,几乎是纯品纤维 素晶体;细菌纤维素跟植物纤维素一样高度晶体化,但是两者晶体中糖基的排列不同, 所以选择不同的底物会影响最后的结论。纤维素结构上的复杂性和不溶于水的性质所 带来的处理上的困难使得高水溶性的羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose,CMC)成 为研究众多纤维素酶,尤其是内切葡聚糖酶的常用底物。不足之处是使用这种底物在 一定程度上削弱了纤维素酶“分解纤维素”意义,毕竟人们希望用纤维素酶来处理不 溶于水的天然纤维素。
1.1.2 纤维素的降解
纤维素的降解主要由酸水解、酶水解和微生物水解。酸和酶水解可用于生产糖浆
供食品工业作甜味剂,并通过发酵转变为醇、燃料和其它化学产品;微生物水解可用 于生产供动物作饲料的单细胞蛋白。
(l)纤维素的酸水解 纤维素大分子中的β-1,4-糖苷键是一种缩醛键,对酸特别 敏感,在适当的氢
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