五甲基槲皮素pmq对3t3-l1脂肪细胞脂联素表达的影响及相关机制研究-effects of pentamethyl quercetin pmq on adiponectin expression in 3t3 - l1 adipocytes and related mechanisms.docxVIP

华中科技大学博士学位论文综述···································································································································49致谢···································································································································82缩略词表（Abbreviation）PMQQUEBSAANPTNF-αIL-6PentamethylquercetinQuercetinBovineserumalbumAdiponectinTumornecrosisfactoralphaInterleukin-6Peroxisomeproliferatoractivated五甲基槲皮素槲皮素牛血清白蛋白脂联素肿瘤坏死因子-α白介素6PPAR过氧化物酶体增殖激活受体ReceptorIBMX3-isobutyl-1-methyl-xanthine3-异丁基-1-甲基黄嘌呤TZDThiazolidinedione噻唑烷二酮DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜MSMetabolicsyndrome代谢综合征MAPKMitogen-activatedproteinkinases丝裂原活化的蛋白激酶IRInsulinresistance胰岛素抵抗PBSPhosphatebuffersolution磷酸缓冲溶液PI3-kPhosphatidylino3-kinase磷脂酰肌醇3激酶RT-PCRreversetranscriptasepolymerasechain逆转录PCRReactionFGF-21Fibroblastgrowthfactor21成纤维细胞生长因子21ROSRosiglitazone罗格列酮C/EBPCAAT/enhancerbindingproteinCAAT/增强子结合蛋白TBAThio-barbituricacid硫代巴比妥酸摘要第一部分PMQ上调成熟3T3-L1脂肪细胞脂联素的表达目的：成熟的脂肪细胞是机体脂肪组织中主要的细胞组分，本实验研究PMQ对成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及可能存在的量效关系和时效关系.方法：3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后，给予不同浓度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小时，检测脂肪细胞脂联素mRNA和蛋白质表达水平。观察给予3μMPMQ后0,3,6,12,24,48小时各时间点脂联素表达的变化。结果：PMQ上调成熟3T3-L1脂肪细胞的脂联素mRNA及蛋白质表达，此作用呈明显的浓度和时间依赖性。第二部分PMQ上调脂联素表达的机制研究目的：研究PMQ增强脂联素表达的分子机制.方法：3T3-L1前脂肪细胞分化成熟后，给予不同浓度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小时。分别检测各组脂肪细胞PPARγ、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白质表达水平；TNF-α和IL-6的分泌水平；AKT的磷酸化水平。观察PPARγ拮抗剂GW9662（10μM）和PI3K抑制剂wortmannin（100nM）对PMQ上调脂联素表达作用的影响。结果：①PMQ浓度依赖性促进PPARγmRNA和蛋白质表达。②PMQ对总AKT无明显影响，但浓度依赖性促进磷酸化AKT的表达。③GW9662和wortmannin本身对脂肪细胞脂联素的表达无明显影响，但能明显拮抗PMQ增强adiponectinmRNA和蛋白质表达的作用。④PMQ浓度依赖性降低TNF-α和IL-6mRNA表达和分泌.结论：PMQ同过增强PPARγ和磷酸化AKT，降低TNF-α和IL-6的表达及分泌增强脂联素的表达。第三部分PMQ对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响目的：脂肪细胞的年更新率约为20%，即每一瞬间都有相当比例的细胞处在分化过程中，本实验研究PMQ对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响。方法：对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化，全程给予PMQ（6天）。分化的第六天提取总RNA和总蛋白，分别检测PPARs和脂肪细胞因子mRNA表达水平、PPARγ和脂联素蛋白质表达水平。结果：①PMQ明显促进PPARα，PPARβ和PPARγ的mRNA表达水平和PPARγ蛋白质表达；②PMQ明显促进脂联素的mRNA和蛋白质表达；③PMQ明显降低TNF-α和IL-6mRNA表达水平；PMQ对FGF-21表达无明显影响。结论：PMQ促进分化过程中脂肪细胞PPARs表