TGFβ1和CD4CD25调节性T细胞表达在系统性红斑狼疮发病中意义.docVIP

TGFβ1和CD4CD25调节性T细胞表达在系统性红斑狼疮发病中意义 　　[摘要] 目的 检测系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血转化生长因子β1（TGFβ1）和CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）的表达，探索其在SLE发病中的作用及临床意义。方法 分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）和二色荧光抗体标记流式细胞仪法，对SLE患者和正常对照组血清TGFβ1和外周血CD4+CD25+调节性T细胞进行检测，并结合临床资料进行分析。结果 血清TGFβ1和外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达在SLE活动组[（715±414）pg/ml、（4.53±0.85）%]明显低于正常对照组[（1314±129）pg/ml、（8.78±2.87）%]和SLE稳定组[（1423±153）pg/ml、（10.89±1.41）%]（均P 0.05）；SLE患者TGFβ1和CD4+CD25+调节性T细胞表达量均与疾病活动度SLEDAI积分呈负相关（r = -0.68，P = 0.002；r = -0.78，P = 0.000），与其他临床指标如24 h尿蛋白量、抗ds-DNA抗体等无相关性。TGFβ1表达与CD4+CD25+调节性T细胞数之间亦未见相关性（r = 0.51，P = 0.113）。此外，血清TGFβ1表达尚与血小板数量和血红蛋白量成正相关（r = 0.71，P = 0.001；r = 0.44，P = 0.042）。结论 活动SLE患者血清TGFβ1和外周血CD4+CD25+细胞表达减少，提示两者可能参与SLE发病，并对判断疾病活动度有一定的临床意义。 　　[关键词] 系统性红斑狼疮；转化生长因子β1；CD4+CD25+调节性T细胞 　　[中图分类号] R593.24+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）07（c）-0004-03 　　系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种典型的异质性自身免疫病，主要表现为自身反应性T、B淋巴细胞过度激活以及多种自身抗体（主要是抗核抗体）的产生，循环免疫复合物沉积或形成，导致多个系统器官损伤等。但SLE病因和免疫耐受紊乱机制等尚未阐明。 　　转化生长因子β（transforming growth factorβ，TGFβ）是一种重要的负性免疫调节细胞因子，在人类中可分为TGFβ1～3，其中最重要的是TGFβ1[1]。CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）是一种参与自身抗原外周耐受和外来抗原免疫应答调节的主要调节T细胞亚群，对维持外周免疫耐受有重要意义[2]。研究表明两者功能上存在着密切联系，如TGFβ可以促使幼稚T细胞向调节性T细胞分化成熟，调节性T细胞可通过分泌TGFβ发挥免疫抑制作用等[3]。因此，TGFβ和CD4+CD25+调节性T细胞分别在细胞因子和细胞水平上对维持机体免疫平衡、免疫耐受等起重要作用，两者数量或功能缺陷均可能导致或加重自身免疫病的发生发展[1-2]。 　　已有研究显示，SLE患者TGFβ和CD4+CD25+调节性T细胞表达和功能异常[4～8]，但结果不统一。为探索SLE免疫紊乱机制，本文对SLE患者血清TGFβ1和外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达进行检测，并结合临床资料进行分析。 　　1 对象和方法 　　1.1 研究对象 　　选择2011年6月～2012年9月本院风湿科门诊及住院SLE患者，均符合1997年美国风湿病学会（ACR）修订的SLE分类标准。据SLEDAI积分法分为活动组（≥10分）和稳定组（10分）。正常对照组为本院体检女性，体检结果无明显异常且年龄与SLE组患者相匹配。 　　1.2 血清TGFβ1检测 　　所有受试者晨起空腹干燥管抽取静脉血2 ml，离心取血清，-80℃保存。采用ELISA法集中检测血清TGFβ1水平，采用美国RD公司TGFβ1检测试剂盒，操作按说明书。 　　1.3 CD4+CD25+调节性T细胞检测 　　采用流式细胞术检测法，取受试者100 μl抗凝静脉血，分别加入10 μl PE标记鼠抗人CD25单抗和FITC标记鼠抗人CD4单抗（均美国BD公司），室温避光放置30 min，再加入红细胞裂解液2 ml，室温避光10 min，2000 r/min 低温离心5 min，弃上清，PBS 2 ml洗涤2次后再加入0.5 ml PBS重悬，EPILS-ALTRA型流式细胞分析仪（美国库尔特公司）检测，EXPO2 软件分析。据前向散射光和侧向散射光以淋巴细胞群设门，测定标本CD4+CD25+调节性T细胞占总淋巴细胞百分率；以单个细胞抗CD25荧光强度≥10设为CD25high细胞，计算CD4+CD25high调节性T细胞占