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PCR与抗体检测对结核性体腔液诊断价值 　　【摘要】 目的：探讨PCR与抗体检测对结核性体腔液的临床诊断价值。方法：选取2010年10月-2014年10月笔者所在医院收治的结核病患者106例，采用聚合酶链反应（PCR）技术检测结核性体腔液中的结核菌DNA，并与培养法、标记亲和素生物素法（BA-ELISA）的检测结果进行对比分析，对比三种检测方法的不同阳性与阴性检出率。结果：采用PCR检测结核性体腔液中结核菌DNA阳性率为70.8%，明显高于BA-ELISA、培养法的阳性检出率57.5%和47.2%，差异均有统计学意义（P0.05）。结论：在结核性体腔液的临床诊断中，PCR为早期快速诊断的理想技术，检测所需时间短，阳性率高，值得在临床诊断中推广应用。 　　【关键词】 PCR； 抗体检测； 结核性体腔液； 诊断价值 　　中图分类号 R52 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）20-0080-02 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.20.045 　　结核病为临床的常见病和多发病，特别是肺外结核属于临床诊断难度较大的疾病治愈。临床常用的体腔液常规涂片具有快速和简单的特点，但是特异性和敏感性较差，耗时比较长，无法满足目前临床诊断的需要。近年来，国内外学者相继报道了聚合酶链反应（PCR）技术用于结核性体腔液的检测，不但快速简便，而且特异性与敏感性高[1]。本研究纳入笔者所在医院收治的106例结核病患者，用PCR检测体腔液中的结核杆菌DNA，对比分析其在临床诊断中的价值，现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2010年10月-2014年10月笔者所在医院收治的结核病患者106例，男76例，女30例，年龄26～78岁，平均（53.2±4.5）岁，临床表现为发烧、夜间盗汗、食欲不振、呼吸困难及严重咯血，所有患者均符合结核病的临床诊断标准，根据临床、细菌学、生化并结合病史确诊，106例标本中，包括胸腹水标本55份、脑脊液标本43份及心包液标本8份。人型结核杆菌悬液由笔者所在城市结核病防治所提供，引物为按照Eisenach报道的二条寡核苷酸序列，是由中国预防医科院病毒所合成，序列为I：5’-CCTGCGAGCGTAGGCGTCG G-3′及Ⅱ：5′-CTCGTCCAGCGCCGCTTCGG-3′[2]。聚合酶为4×dNTP、TagDNA聚合酶，扩增产物为123bp（上海科华实业公司生产研制），而PCR扩增仪是由中国科学院遗传研究所生产研制。 　　1.2 方法 　　106例体腔液标本中的结核菌基因组DNA抽提，PCR扩增与产物鉴定均根据标准规范进行，检测采用斑点金免疫渗滤试验（DIGFA），并采用型号为ABI7500型实时荧光定量PCR仪，扩增程序根据试剂盒说明来操作，结合分枝杆菌荧光PCR检测参数为93 ℃ 2 min、93 ℃ 45 s以55 ℃ 60s，重复10个循环，并重复93 ℃ 30 s、55 ℃ 45 s，30个循环[3]。根据PCR的检测标准，以Ct=30为界，如果Ct30，视为检测为阳性，如果≥30，视检测结果为阴性，数值有相关的软件计算得出。结合分支杆菌培养采用快速培养法，于全自动结核菌培养系统中培养，并根据结核病诊断实验室规程对培养结果进行判定[4]。 　　BA-ELISA检测方法步骤：（1）包被抗体→加样→加B-Ab→加A-HRP→底物显色→判定结果。 　　1.3 观察指标 　　本研究的观察指标为样本检测的阳性率与阴性率，对比三种检测方法的不同阳性与阴性检出率。 　　1.4 统计学处理 　　采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料比较采用字2检验。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 PCR检查结核杆菌基因组DNA敏感性情况 　　首先从患者结核性体腔液中抽提结核杆菌基因组DNA，采用754型分光光度计进行定量抽提，然后从80 pg连续10倍梯度稀释到0.8 fg，稀释完成后，仍可观察到123 np特异性扩增片段，依此为根据，判断PCR检测结核杆菌基因组DNA敏感性为10个以下结核菌单位，说明PCR检测方法的检出效果理想，适宜在临床检测中推广。 　　2.2 标本PCR、培养法及BA-ELISA检测结果对比情况 　　本研究106份样本培养液，42份脑脊液样本中，PCR检测阳性为11份、胸跟BA-ELISA检测阳性比较，差异均无统计学意义（P0.05）；培养阴性方面，PCR检测脑脊液、胸水、腹水及心包液跟培养法检测比较差异均无统计学意义（P0.05），详见表1。 　　3 讨论 　　结核病是由结核分枝杆菌诱发的慢性传染性疾病，属于临床常见病和多发病，主要发病机制为，结核菌进入人