PCR反向点杂交法检测人乳头瘤病毒分型在确定早期宫颈癌中价值.docVIP

PCR反向点杂交法检测人乳头瘤病毒分型在确定早期宫颈癌中价值 　　【摘要】 目的：研究以PCR反向点杂交法检测人乳头瘤病毒（HPV）分型，对提升宫颈癌（SCC）早期确诊率的价值。方法：以332例门诊疑似宫颈癌患者为研究对象，首先行PCR反向点杂交法确定分泌物中HPV分型，续行液基薄层细胞检测（TCT），将HPV及TCT联合检测结果归入观察组；将TCT检测结果单独归入对照组。以组织病理学诊断为金标准，对比三项检测结果，并明确观察组与对照组灵敏度、特异度及Youden指数。结果：（1）HPV阳性率32.2%（107/332）；TCT阳性率30.4%（101/332），其中HPV阳性率68.3%（69/101）；组织病理学检测阳性率20.5%（68/332），其中HPV阳性率89.7%（61/68）。（2）观察组灵敏度88.4%，特异度97.0%，Youden指数0.854；对照组灵敏度49.5%，特异度92.2%，Youden指数0.417。观察组显著性更优，差异有统计学意义（P0.05）。结论：行PCR反向点杂交法检测HPV分型，有助于提升TCT检测的灵敏度和特异度，对SCC早期诊治具有重要价值。 　　【关键词】 PCR反向点杂交法； 人乳头瘤病毒； 宫颈癌； 早期诊断 　　中图分类号 R711.74 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2014）33-0005-02 　　宫颈癌（SCC）是威胁女性健康的主要疾病之一，研究显示从癌前病变发展为浸润性癌症需经过3～10年，而疾病早期可控性较高，因此临床多建议及早确诊，尽快防治[1]。目前临床多以液基薄层细胞检测（TCT）作为主要筛查方案，但部分研究指出其灵敏度及特异度均有所欠缺[2]。有学者指出，生殖道高危人乳头瘤病毒（HPV）感染，是导致宫颈上皮内瘤变（CIN）的基础条件，因此推测其可能有助于宫颈癌的早期诊断[3]，但尚缺临床验证。基于此，本文以PCR反向点杂交法检测HPV分型，并分析其对宫颈癌早期诊治的价值，报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　研究对象为2013年1-12月于笔者所在医院门诊就诊的宫颈异常患者，共332例，临床表现包括宫颈糜烂、肥大、充血、接触性出血等。患者年龄18～73岁，平均（42.8±12.3）岁。 　　1.2 剔除标准 　　近期妊娠；免疫系统抑制性疾病；未签署知情同意书；合并其他器质性疾病。 　　1.3 研究方法 　　所有对象均先行PCR反向点杂交法确定HPV-DNA分型，并以检测出高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4），且HPV-DNA≥1.0 pg/ml为阳性；续行TCT检测，以细胞学检测出非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）及鳞状细胞癌（SCC）为阳性。以TCT检测结果为对照组，TCT联合HPV分型诊断结果为观察组。最后行阴道镜下组织病理学活检，以CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级及SCC为阳性，以此为金标准，评价观察组与对照组检测效果。 　　1.3.1 PCR反向点杂交法 试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供，可检测出上述18种高危HPV及另5种低危HPV。以宫颈刷收集标本，并将细胞洗脱入1 ml生理盐水中。将待用探针编号并点到尼龙膜上，以待测DNA样本杂交。经显色反应后，以DAAN7600型PCR检测仪分析结果。 　　1.3.2 TCT检测 以特制颈管刷置入宫颈管，转动5周，收集脱落细胞标本并洗入保存瓶。以液基层细胞制片机处理样本。行TBS描述性诊断，除上述四种阳性异常外，认为正常或炎性反应性细胞改变为阴性检出。 　　1.3.3 组织病理学诊断 行阴道镜下常规4点活检，明确病变位置者可行病变处取活检。诊断标准严格依据2001年国际癌症协会推荐标准。除上述三项阳性病变外，认为无上皮内病变或恶性病变（NILM）及CIN Ⅰ级为阴性检出。 　　1.4 观察指标 　　统计两组灵敏度、特异度及Youden指数。灵敏度=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）×100%；特异度=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）×100%；Youden指数=敏度度+特异度-1。 　　1.5 统计学处理 　　应用SPSS 19.0软件处理数据，计数资料行字2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 三种检测方案检测效果统计 　　HPV阳性率32.2%（107/332）。TCT阳性率30.4%（101/332），231例TCT阴性患者中，HPV阳性者38例，阴性者193例，HPV阳性率为16.5%；101例TCT阳性患者中，HPV阳性者69例