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piRNA生物功能和研究技术 　　摘 要 piRNA（PIWI-interacting RNA）是近年来发现的一种非编码小RNA（non-coding RNA ncRNA）。它主要在生殖细胞中表达，与生殖系统DNA完整性、翻译过程、转座子转录和动物生育能力的调节等有关。该文对piRNA沉默转录过程、piRNA芯片技术、生殖系和干细胞维护及piRNA在癌症治疗等方面的最新进展进行总结，并对这些方面进行了简单评述。 　　关键词 piRNA；转座子沉默；piRNA芯片；生殖系干细胞；癌症 　　中图分类号 Q81 文献标识码 A 文章编号 1674-6708（2016）162-0195-02 　　piRNA是近年来发现的一类新的非编码小RNA，2006年，piRNA首次被科学家们发现并于小鼠睾丸内分离出来。piRNA由24-32个核苷酸组成，因其能与Piwi蛋白家族成员结合发生相互作用，故称为Piwiinteracting RNAs，即piRNAs。piRNA有如下特点：来源于单链RNA前体、普遍分布在整个基因组上但具有高度的不连续性、5′端多具有尿嘧啶偏向性、多分布于动物生殖细胞和胚胎干细胞内、多数位于基因间隔区、少数分布在基因内含子和外显子中。piRNA的生物功能多种多样，主要有沉默转座子、阻碍转录翻译、调节生育能力和影响遗传信息传递等。据专家统计，在当今社会，每小时就会有3个物种灭绝，这在很大程度上是因为遗传信息传递失败所致，研究piRNA的生物学特性有利于挽救濒危物种。目前，癌症是影响我国公共健康的主要问题，与piRNA相结合的piwi家族在有机体干细胞自我更新、配子发生和RNA干扰等生物过程中发挥着关键作用，piwi家族过表达很可能会引起生殖肿瘤形成，因此，通过调节piRNA的生物学活性可以相应的减少癌症的发生。本文对piRNA在沉默转录基因、调节翻译、维持生殖系和干细胞及治疗癌症方面发挥的作用和piRNA芯片技术的进展进行综述，以期对相关领域的研究人员有所帮助。 　　1 沉默转录基因和调节翻译过程 　　piRNA是一种特异表达的内源性小分子RNA，存在于果蝇、斑马鱼、哺乳动物的生殖细胞和早期胚胎中，在机体内主要位于基因间隔区。piRNA能够和Piwi蛋白结合发挥作用，它是由呈束状排列的DNA序列（piRNA簇）转录产生的。piRNA簇中有相应的转座子片段，可以促使piRNA攻击相关转座子，进而沉默该转座子的基因转录过程。另外，在精子形成过程中，Miwi和piRNA与帽结合复合体联结，调节mRNA的稳定性，影响翻译。piRNA能够沉默基因转录过程，例如，Erwin等[ 1 ]以发育不全患有D.virilis综合症的果蝇为研究对象，观察到以下现象：转座因子的效应会随着piRNA的增多而减小，不同亲代在转座因子的影响下其后代发育的情况也有很大差异，证实piRNA能够使转座子沉默，导致果蝇发育过程中部分基因的转录过程发生改变。Senti等[2]对果蝇卵巢中piRNA生物转化途径之间的相互关系进行分析，发现piRNA能使生殖细胞中的与卵子发生有关的转座子沉默，影响原有基因的转录，从而影响卵子的产生。除此之外，piRNA能对翻译过程进行调节，Gou等[ 3 ]发现小鼠Miwi和piRNA与帽结合复合体联结后，精子细胞中的mRNA被大规模清除，影响生殖细胞中部分mRNA的翻译。 　　2 维持生殖系和干细胞功能 　　piRNA存在的主要场所是生殖细胞和干细胞，与Piwi亚家族蛋白结合形成piRNA复合物（piRC），目前，piRNA的功能主要是根据Piwi蛋白来推测的。Piwi有维持生殖系和干细胞的功能，Piwi亚家族主要由MIWI，MILI和MIWI2等特异蛋白组成，在精子的发育形成中发挥着至关重要的作用。三个特异性蛋白都出现在减数分裂时期，其中一个缺失，精子形成就会出现缺陷。小鼠MIWI2突变体和果蝇Piwi突变体的生殖细胞表型相同，证明了小鼠的MIWI2和果蝇的Piwi在维持生殖系和干细胞功能方面起着类似的作用。此外，piRNA在生殖细胞中的富集现象和Miwi突变种的雄性不育都体现出了piRNA与配子形成有关。例如，Gonzalez等[ 4 ]以果蝇为实验对象，发现果蝇睾丸中的Piwi蛋白不仅能够维持生殖系干细胞（GSC）也能维持体细胞囊肿干细胞（CySC）的发育，另外，Piwi蛋白对生殖系干细胞有一定的调节作用。如果降低果蝇睾丸中Piwi蛋白的活性，干细胞的分化就会受阻，干细胞功能也就不能实现，影响睾丸中精子的形成。Pek等[5]发现在缺乏与piRNA沉默转座子相关的蛋白时生殖系干细胞分裂将会被阻塞，不能顺利完成分化过程。Zhao等[6]报道，piRNA与MIWI结合可以导致精子细胞中的泛素蛋白酶体降解。经研究发