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OLC1在喉鳞状细胞癌中表达及其临床意义 　　摘要：目的 检测OLC1在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学方法检测48例喉鳞状细胞癌组织中OLC1 的表达情况，并分析OLC1 与喉鳞状细胞癌临床病理特征及预后的关系。结果 OLC1在喉鳞状细胞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织。OLC1蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤分型无关，而与组织学分级、淋巴结转移、临床分期正相关。结论 OLC1高表达可能与喉鳞状细胞癌发展的恶性进程有关，提示喉鳞状细胞癌患者预后不良。 　　关键词：喉鳞状细胞癌；OLC1；临床意义 　　文献标识码：A 　　喉鳞状细胞癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，近年来流行病学资料显示喉鳞状细胞癌的发病率在我国呈上升趋势，患者发病年龄呈年轻化趋势。虽然外科手术治疗及术后化疗使病人的术后生存率有了较大提高，然而总体预后仍不容乐观。喉鳞状细胞癌具有高侵袭性，其发生、发展是一个多基因多阶段的演进过程。OLC1（over expressed in lung cancer） 基因是我国学者在肺癌组织中通过高发量实验筛选出的一个肺癌相关新基因，研究发现OLC1具有癌基因的属性，参与肿瘤的发生发展。本研究采用免疫组织化学方法检测OLC1蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达，探讨OLC1 在喉癌鳞状细胞发生、发展中的作用及临床意义。 　　1资料与方法 　　1.1临床病例 选取赣南医学院第一附属医院2011年1月～2013 年12月间行喉鳞状细胞癌根治术且随访资料完整的48例病例，术前均未进行放、化疗及免疫治疗，且术后均在本院根据NCCN指南进行放疗。 其生存期从手术之日起开始计算，终止日期为死亡期或末次随访日期2014年12月15 日。男43例、女5例、年龄46～75岁、淋巴结转移19例、无淋巴结转移29例。48例喉鳞状细胞癌组织中组织学分级：高分化例9，中分化31例，低分化8例。 根据国际抗癌协会TNM分期方案分为Ⅰ期10例、Ⅱ期8例、Ⅲ期20例、Ⅳ期8例。 另外随机选取远离肿瘤（?1cm）的肿瘤旁正常组织（镜下无癌）20例作对照组。 　　1.2方法 　　1.2.1检测方法 所有患者的手术标本离体后迅速投入10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4μm 连续切片，分别行HE染色及免疫组化染色。所有病例均由两位病理医师确诊。主要试剂OLC1兔抗人多克隆抗体，稀释比例为1：2000，武汉三鹰生物技术有限公司；采用免疫组织化学法，实验步骤严格按照实验说明书进行，每批实验均设对照组。 　　1.2.2结果判定 分别由2名高年资的病理科主治医师进行独立阅片，根据其评分的平均值采用 VOLM 双评分法进行判定。①按阳性细胞百分率评分：光镜10×20倍下，随机选择5个染色均匀视野，阳性细胞百分率≤25%为1分，阳性细胞百分率26%～50%为2分，阳性细胞百分率50%为3分；②按染色强度评分：无显色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。 将上述两项得分相加：0～2分判为+，3～4分判为++，5～6 分判为 +++ 。 ++和+++ 为阳性表达，+ 为阴性表达。 　　1.2.3统计学方法 应用SPSS13.0 统计软件，组间比较采用 χ2检验，P≤0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1OLC1蛋白在喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达 OLC1蛋白染色阳性定位于细胞浆，棕黄色粗颗粒状。OLC1蛋白在癌旁组织中呈阴性表达，在喉鳞状细胞癌组织呈阳性表达（图1），超过70%的喉鳞状细胞癌细胞有不同程度OLC1 表达，40.8%的肿瘤呈中等程度表达，31%的肿瘤呈强阳性表达，见图1。 　　2.2OLC1蛋白与喉鳞状细胞癌临床病理因素的关系 OLC1蛋白在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期、病理分级有关（P均0.05），与临床分型、肿瘤大小、年龄和性别无关，见表1。 　　3讨论 　　OLC1基因是我国学者在肺癌组织中通过高通量实验筛选出的一个肺癌相关新基因。OLC1的全长cDNA长度为2383bp，其编码一条长度为360氨基酸的多肽，含有DUF292和Proline-rieh两个保守结构域。Yuan等研究发现OLC1基因在肺鳞状细胞癌中的表达量要显著高于正常肺泡上皮细胞，随后的研究发现OLC1不仅在肺鳞状细胞癌中过度表达，在肺腺癌及小细胞肺癌中也呈过度表达，而且在肺鳞状细胞癌发生的早期，OLC1的表达量就已经升高；稳定高表达OLC1的NIH/3T3细胞能在裸鼠皮下形成肿瘤，说明OLC1具有癌基因的属性；若沉默OLC1的表达能引起肺癌细胞系H520和H1299生长变缓，集落形成减少和细胞凋亡发生；通过构建OLC1稳定高/低表达的食管鳞癌细胞系，研究细胞表型的改变，发现OL