不同产地花脸香蘑菌丝体及子实体RAPD分析.docVIP

不同产地花脸香蘑菌丝体及子实体的RAPD分析 　　摘要：采用RAPD分析了5个不同产地的花脸香蘑（Lepista sordida）菌丝体和子实体的DNA多样性。用12种引物分别对5种样品进行PCR扩增，从中选出8种引物扩增后的结果进行数据分析，计算样品间的遗传相似系?担?GS值），进而根据遗传相似系数矩阵，利用UPGMA法进行聚类分析。结果表明，花脸香蘑菌丝体和子实体分为两个类群，又将3个不同产地的菌丝体分为2个亚群，为花脸香蘑后期研究提供参考。 　　关键词：花脸香蘑（Lepista sordida）；DNA多样性；聚类分析 　　中图分类号：S646 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）14-2758-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.14.041 　　Abstract： Using RAPD analysis of the five different regions of mycelia and fruiting body of Lepista sordida DNA diversity. Respectively with 12 primers for PCR amplification， five samples selected by 8 primers amplification result for data analysis， the genetic similarity coefficient between the sample value（GS），and then according to the genetic similarity coefficient matrix， the cluster analysis using UPGMA method. The results showed that RAPD mycelia and fruiting body Lepista sordida method is divided into two groups， and the mycelium of three different regions can be divided into two subsets， it can be seen that the genetic relationship provide reference for later study of Lepista sordida. 　　Key words： Lepista sordida； DNA diversity； clustering analysis 　　花脸香蘑（Lepista sordida）又名紫香花脸蘑，隶属于伞菌目（Agaricales）白蘑科（Tricholomataceae）香蘑属（Lepista）[1]，花脸香蘑的子实体营养丰富，风味独特，是一种具有较高开发价值的食用菌[2]。但人工栽培的花脸香蘑存在子实体易碎、不易运输等缺陷，有待于通过杂交等育种方式进行改良，这就需要对花脸香蘑种质资源进行广泛采集和科学鉴定，以避免因形态相似或分离失误而出现偏差[3]。 　　本研究利用RAPD技术，鉴定花脸香蘑菌株，克服传统的标记手段和形态分类学的缺点，为花脸香蘑的深入研究提供了强有力的工具和手段，其应用和发展前景广阔。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　花脸香蘑1号菌种购于苏州北纳创联生物技术有限公司，编号为BNCC117075，采集地为山东；花脸香蘑2号菌种购于苏州北纳创联生物技术有限公司，编号为BNCC110924，采集地为黑龙江；花脸香蘑3号菌种由吉林大学珠海学院化学与药学系实验中心提供；花脸香蘑4号子实体产地为内蒙古大兴安岭阿尔山林区；花脸香蘑5号子实体产地为吉林长白山地区，以上5种菌类原始样品，样品编号1～5。 　　1.2 基因组DNA的提取 　　采用CTAB法提取样品基因组DNA，具体步骤参考Zhang等[4]方法进行。 　　1.3 RAPD分析 　　1.3.1 RAPD反应体系和扩增条件 PCR扩增体系（20 μL）为DNA模板2 μL、Primer 1 μL、DNA Mix 10 μL、去离子水7 μL。PCR扩增程序为94 ℃预变性 3 min；94 ℃变性30 s，36 ℃退出50 s，72 ℃延伸1.5 min，40个循环；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存[5]。 　　1.3.2 RAPD扩增产物的检测 利用表1中的12种引物对5个样品进行PCR扩增，PCR产物在2.0%的琼脂糖凝胶电泳中检测。 　　1.4 数据统计分析 　　PCR扩增产物电泳位置在凝胶某个相同迁移率位置上有