一株木霉菌SWFC1511原生质体形成及再生条件研究.docVIP

一株木霉菌SWFC1511原生质体形成及再生条件的研究 　　摘要研究了一株木霉菌SWFC1511菌株原生质体的制备及再生条件,并观察其原生质体释放过程。结果表明:木霉菌SWFC1511原生质体制备的最佳条件为:菌丝培养20 h后,用比例为1∶3的2%溶菌酶与2%蜗牛酶为酶解液,在35 ℃下酶解3 h后,原生质体的产量较高。所形成的原生质体在再生培养基1上的再生率较高。 　　关键词木霉菌;原生质体;形成;再生 　　中图分类号Q813文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)22-0035-03 　　 　　Research onProtoplastFormationandRegenerationofTrichodermaStrainSWFC1511 　　CHENG Li-jun 1CHEN Yu-hui 1,2 *PENG Shu-min 1LI Yong-yan 1HU Zhi-fang 1 　　(1 Faculty of Conservation Biology,Southwest Forestry College,Kunming Yunnan 650224; 2 Key Laboratory of Forest Disaster 　　Warning and Control in Yunnan) 　　AbstractThe conditions for protoplast preparation and regeneration were studied on Trichoderma SWFC1511 strain,and the releasing process of protoplast was observed.Results showed that the optimal conditions for protoplast preparation of Trichoderma SWFC1511 strain were as follows:after 20 h mycelium growth time,the hydrolysate was composed of 2% lysozyme and 2%snailase at the ratio of 1∶3,for 3 h reaction at 35 ℃,the high yield of protoplast was got,the protoplast had higher regeneration rate at regeneration medium 1. 　　Key wordsTrichoderma SWFC1511;protoplast;formation;regeneration 　　 　　木霉(Trichoderma spp.)属微真菌,广泛存在于土壤、根围、叶围、种子和球茎等生态环境中,具有广泛的适应性、广谱性及多机制性,一直是植病生防学家研究的重点对象[1-2]。有关木霉菌对植物病害生防作用的研究,现阶段已经取得了大量成果,并已筛选出许多高效菌株用于生物防治,在防治植物病害方面发挥了一定作用。但由于自然界中直接筛选得到的木霉菌株在控制植物病害的过程中常受到各种环境因子的限制,因此,有必要对菌株进行改良,提高菌株的环境适应能力和生物防治效果。利用原生质体诱变育种是对木霉菌株改良的主要途径之一,其前提条件是制备高质量可再生的原生质体。由于真菌细胞壁组成的复杂性影响原生质体的制备,同属不同种的菌株原生质体制备的最适条件存在差异[3]。为此,笔者对一株生防木霉菌的原生质体制备条件进行研究,以期为菌株的进一步改良奠定基础。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　1.1.1供试菌株。木霉菌SWFC1511,由西南林业大学分离保存。 　　1.1.2生化试剂。0.6 mol/L NaCl溶液:将35.064 g NaCl溶解于1 000 mL去离子水中,灭菌后待用。渗透压稳定液:Na2HPO4?12H2O 1.1462 g和NaH2PO4?2H2O 5.7426 g,溶于0.6 mol/L的NaCl溶液中,并定容至200 mL。溶菌酶(购自amresco公司)和蜗牛酶(购自上海源聚生物科技有限公司)用渗透压稳定液分别配制成2%的浓度,微孔滤膜除菌,然后按一定比例混合作为酶解液,4 ℃保存。 　　1.1.3培养基。有以下5种培养基:PDA培养基:马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂 15 g,无菌水1 000 mL。PD液体培养基:不加琼脂的PDA培养基。再生培养基1:NaCl 3 g,MgSO4?7H2O 0.05 g,KCl 0.5 g,FeSO4?7H2O 15 mg,CuSO4?5H2O 20 mg,K