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二甲基亚砜对泡状棘球蚴原头节的影响 　　摘要：目的 探讨溶媒二甲基亚砜对体外培养泡状棘球蚴原头节的毒性作用，为药物实验筛选合适的助溶剂浓度。方法 观察不同浓度的DMSO干预下的泡状棘球蚴原头节的存活生长情况，记录原头节的存活率。结果 DMSO低浓度组（0.10、0.50、1.00 g/ml）几乎无细胞毒性。DMSO浓度≥2.00g/ml时，随浓度和作用时间的加长，泡球蚴原头节存活率下降。2.00g/ml组作用8d时；4.00g/ml组作用6d、8d时；8.00g/ml组作用4d、6d时，与空白组有显著差异（P0.05）。作用8d时，8.00g/ml组原头节全部死亡。结论 对泡状棘球蚴原头节进行体外药物干预实验时，浓度小于等于1.0g/ml的DMSO可用作助溶剂，该浓度泡球蚴原头节毒性作用小。 　　关键词：泡状棘球蚴；二甲基亚砜；原头节 　　泡型棘球蚴病（alveolar echinococcosis，AE）是由多房棘球绦虫（Echinococcosis multaloculuras，Em）幼虫寄生于人体所致的一种致死性的寄生虫病。泡型棘球蚴病可发病于机体多个部位，以肝脏发病最多见。目前，肝泡型包虫病的手术治疗相对肝囊型包虫病（Echinococcosis granulosa，EG）要困难，且并非所有患者初诊时都能施行根治性手术，有些患者不能耐受手术或已经失去手术时机，对于这些患者，药物治疗则成为最佳治疗手段。但是目前包虫病的药物治疗效果仍不理想[1]，部分患者无法耐受且可引起不良反应[2，3]，因此，有效的、副作用小的抗包虫药物制剂是包虫病防治研究的重要课题之一。 　　抗包虫新药的研发过程中，首先要进行药物的体外实验，部分药物样品水溶性较差，需要加入有机溶剂或表面活性剂对其进行溶解，而有机溶剂或表面活性剂本身都有不同程度的细胞毒性或能够影响细胞生长，不同的溶剂间和不同细胞间存在着差异。二甲基亚砜（DMSO）是常用的助溶有机化合物，DMSO对许多药物具有溶解性、渗透性，能增加药物吸收和提高疗效，常作为细胞冷冻保护剂用于骨髓、脐血的超低温长期保存[4]。本研究旨在考察常规细胞培养条件下，泡状棘球蚴原头节对DMSO的耐受范围和最大耐受浓度，为其在药物干预中应用提供浓度参考。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1实验动物及仪器 感染泡球蚴仓鼠（腹腔保种16W）购于新疆自治区疾病控制中心；二氧化碳恒温细胞培养箱，美国Thermo Fisher公司生产；倒置荧光显微镜，日本Olympus公司生产；超净工作台，中国博讯公司生产。 　　1.1.2主要试剂 DMEM（High Glucose）培养液购于Thermo Fisher公司；胎牛血清购于碧云天公司；青霉素、链霉素购于南京生兴生物技术有限公司。 　　1.2方法 　　1.2.1泡状棘球蚴原头节的收集 安乐死种鼠，在无菌条件下取出种鼠腹腔内泡型棘球蚴组织，无菌PBS液漂洗三次，剪碎、研磨、过80目钢筛，无菌PBS液冲洗，1000μl移液器充分吹打后静置，可看见分三层：最下层为较少量瓷白色的头节，中间层为包囊破碎组织、生发层细胞等（最多），最上层为宿主破碎组织（肝组织、血液等）。移液器移除最上层和部分中间层悬浊液后，添加适量PBS，吹打数次后静置。重复三次后，弃上清液，1000μl充分吹打液体，迅速用10μl移液器抽取10μl悬浊液滴于载玻片上，滴加0.5%伊红染液，盖盖玻片，镜下观察，结构清晰，若染色率≤10%，可用于体外培养实验。 　　1.2.2实验分组 称量DMSO，以完全培养基稀释至所需实验浓度，混匀后微孔滤过膜过滤除菌。按DMSO不同浓度，实验分组为0、0.10、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00g/100ml。收集原头节，按实验分组与含不同浓度DMSO培养基混匀后置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，每组中约5000枚泡状棘球蚴原头节。 　　1.2.3泡状棘球蚴原头节活性的计算 每组等量取20μl原头节培养液伊红染色，在倒置显微镜下观察判断标准：活力减弱或死亡的原头节染红色，无活动性，可伴结构破坏；活头节不着色且有活动性。计数每100个原头节中着色数目，以有活力头节占所观察原头节的比例计算存活率，每组每时间点共300个原头节计算存活率。至最高浓度DMSO组原头节无活性头节。 　　1.3统计学分析 用SPSS17.0统计软件进行统计分析，结果用（x±s）表示。按α=0.05为水准，以P0.05为有统计学差异，组间两两比较采用LSD-t检验。 　　2 结果 　　各组泡球蚴原头节的存活率 DMSO低浓度组（0.10、0.50、1.00g/ml）与空白组头节存活率差异无统计学意义（P0.05），DMSO浓度≥2.00g/ml