低温胁迫对克恩氏冬青超微结构及细胞内Ca2分布影响.docVIP

低温胁迫对克恩氏冬青超微结构及细胞内Ca2+分布的影响 　　摘要：在低温胁迫条件下，分析克恩氏冬青细胞内的超微结构和Ca2+分布与抗寒性的关系。结果表明：随着低温胁迫的增强，细胞内细胞器受损程度也增强，到-16 ℃时，细胞膜系统出现了严重的损伤，同时细胞内Ca2+沉淀量随温度的降低而增加。 　　关键词：克恩氏冬青；低温胁迫；叶片细胞；超微结构；Ca2+分布 　　中图分类号： Q945.78 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）03-0166-03 　　克恩氏冬青（Ilex×koehneana ‘Emily Bruner’）为冬青属常绿阔叶小乔木，是近期引进的欧洲冬青杂交品种。许多冬青属在低温胁迫条件下有较好的耐寒性，可以引种到北方地区[1]，一般来说，植物细胞内Ca2+分布及超微结构会随着低温的变化而呈一定的相关性[2]，Ca2+作为胞内第二信使调节着植物体内的许多代谢和发育过程，因而起重要作用[3-6]。为进一步研究克恩氏冬青的生态适应性及其栽培和推广的制约因素，于2012年对克恩氏冬青的耐寒性进行系统研究，解析不同温度条件下克恩氏冬青的解剖结构和低温胁迫的关系，从而深入研究克恩氏冬青的细胞学机制，为克恩氏冬青选育及栽培提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　2012年6月将6种克恩氏冬青扦插于南京林业大学内，待生根后及时上盆，放置于树木园温室内待用。 　　1.2 方法 　　将样品在25 ℃下放置1周进行预冷，然后移至人工气候室（-40～25 ℃），以5 ℃为1个阶梯逐级降温，分别降到0、-8、-16 ℃时各维持48 h，及时采取低温处理好的植物顶端叶片迅速切成0.5 mm×0.5 mm的组织块，并沉入到用 0.2 mol/L 磷酸缓冲液（pH值7.2）配制的2%多聚甲醛和2.5%戊二醛混合液中，室温黑暗初固定6 h；然后用含2%焦锑酸钾的缓冲液（pH值 7.6）洗涤3次，每次约0.5 h；再转移到含2%焦锑酸钾的缓冲液（pH值7.6）配制的1%锇酸中，在4 ℃冰箱内固定过夜。将2次固定过的组织块用重蒸水洗涤4次后，再用pH值为10.0的重蒸水（用0.1 mol/L KOH 调节pH值）洗涤2次，每次约0.5 h。随后经系列冷乙醇脱水，环氧丙烷过渡，Epon812（环氧树脂）包埋，LKB-V型超薄切片机切片，切片经0.5%醋酸双氧铀染色，在H-600 型透射电子显微镜下观察照相。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同低温胁迫下克恩氏冬青叶片细胞的超微结构 　　2.1.1 0 ℃条件下克恩氏冬青叶片细胞的超微结构 　　由图1可知，叶绿体仍然紧贴细胞壁排列，细胞核大部分较正常，少部分细胞核的核膜变得模糊，同样近一端分布，液泡中有少量高电子密度的嗜锇物质分布；叶绿体中嗜锇颗粒含量仍然较少且不含淀粉粒，其中叶绿体类囊体片层排列虽然规则、有序，但少部分清晰可见，大部分已模糊不清，线粒体略正常。 　　2.1.2 -8 ℃条件下克恩氏冬青叶片细胞的超微结构 　　由图2可知，叶绿体仍然紧贴细胞壁排列，细胞核较正常，仍然近一端分布，液泡中含少量高电子密度的嗜锇物质；叶绿体中嗜锇颗粒含量仍较多，同样不含淀粉粒，其中类囊体片层排列仍然规则、有序；同样，叶绿体大部分类囊体片层排列规则、有序且清晰可见，少部分叶绿体类囊体片层模糊，线粒体略正常。 　　2.1.3 -16 ℃条件下克恩氏冬青叶片细胞的超微结构 　　由图3可知，叶绿体已不贴细胞壁排列，叶绿体及其他细胞器散落在细胞中；细胞中含有很少量的高电子密度嗜锇物质，多数叶绿体被膜消失，所含嗜锇颗粒含量较多，不含淀粉粒，其中叶绿体的类囊体片层扩张并且不清晰，细胞核、线粒体受损（图3中的箭头所指的部位为受损部位）。 　　2.2 低温条件对克恩氏冬青叶片中Ca2+分布的影响 　　2.2.1 0 ℃条件下克恩氏冬青叶片中Ca2+的分布情况 　　由图4可知，在0 ℃低温下，克恩氏冬青叶片中的细胞间隙有Ca2+沉淀，在细胞壁外侧、叶绿体膜和液泡膜上的Ca2+沉积比细胞器上多，细胞核上有少量沉淀。 　　2.2.2 -8 ℃条件下克恩氏冬青叶片中Ca2+的分布情况 由图5可知，在-8 ℃低温胁迫下，克恩氏冬青叶片的细胞壁外侧、细胞间隙上有Ca2+沉积，大多情况下叶绿体、细胞壁、液泡上有少量沉积。 　　2.2.3 -16 ℃条件下克恩氏冬青叶片中Ca2+的分布情况 　　由图5、图6可以看出，在-16 ℃低温处理下，Ca2+沉淀明显多于-8 ℃低温处理。类囊体片层或消失或模糊不清，叶绿体游离到细胞内，不再紧贴细胞壁，且多数严重肿胀，细胞中液泡内、细胞质和叶绿体中、细胞壁上有少量Ca2+沉积（图6）。 　　3 结论与讨论