复方甲苯咪唑乳膏微生物限度检查方法研究.docVIP

复方甲苯咪唑乳膏微生物限度检查方法研究 　　【摘 要】 目的：建立复方甲苯咪唑乳膏的微生物限度检查方法。方法：按《中国药典》2015年版第三部通则非无菌微生物限度检查法规定的常规法进行验证。结果：铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌以常规法验证回收率均大于70%，铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌菌液对照组和试验组生长良好。结论：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数采用常规的平皿倾注法，控制菌的检查采用常规法。 　　【关键词】 复方甲苯咪唑乳膏；微生物限度检验法；药品检验 　　【中图分类号】R286.0 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）11-0012-02 　　复方甲苯咪唑乳膏用于驱除蛔虫、蛲虫，其主要成分为盐酸左旋咪唑和甲苯咪唑。为了保证所采用的检验方法适合于该药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数以及控制菌的检查，确认供试液制备、测定方法及检测系统适用于该药品的检验。研究参照《中国药典》[1]2015年版第三部通则“1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”以及“1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”、《中国药品检验标准操作规范》[2]，建立复方甲苯咪唑乳膏微生物限度检验方法，并进行方法适用性试验，现报道如下。 　　1 仪器与材料 　　1.1 试验环境 根据2015年版《中国药典》第三部“9203药品微生物质量管理原则”[3]规定，试验在环境洁净度B级、局部洁净度A级的单向流空气的无菌室进行，阳性菌操作在符合国家Ⅱ级生物安全标准的生物安全柜内进行。 　　1.2 仪器 BHC-1300ⅡA2型生物安全柜（苏州苏净仪器自控设备有限公司）；GHP-9162型电热恒温培养箱（上海金慧科电子有限公司）；MJX-160B-Z型微电脑霉菌培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；DYX-DHS型隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；YXQ-LS-75SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器（上海市博讯实业有限公司医疗设备厂）；TZQ-Ⅱ型匀质器型号（天津市津德实验仪器技术开发中心）。 　　1.3 材料 复方甲苯咪唑乳膏（批号：160101、160102、160103，宿州亿帆药业有限公司），0.1%无菌吐温溶液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（自配），胰酪大豆胨液体培养基（TSB，批号00）、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA，批号00）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA，批号00）、甘露醇氯化钠琼脂培养基（批号00）、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基（批号00）、沙氏葡萄糖液体培养基（SDB，批号00）等均由杭州微生物试剂有限公司提供。 　　1.4 试验菌种 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B） 10 104]、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B） 63 501]、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B） 26 003]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F） 98 001]、黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC（F） 98 003]等由中国医学菌种保藏中心和中国药品生物制品检定所提供，试验用菌株的传代次数为3代。 　　2 方法与结果 　　2.1 菌悬液的制备及菌悬液菌落数的检查 　　2.1.1 菌悬液的制备 取经35℃培养18～24h的铜绿假单胞菌的TSB培养物1ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至10-6备用，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌用同样方法分别稀释至10-5和10-8备用，取经25℃培养2～3天的白色念珠菌的SDB培养物1ml，用上述方法稀释至10-5，备用；取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加4mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液洗下黑曲霉孢子，吸取出孢子悬液1ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至10-6，备用。 　　2.1.2 菌悬液中菌落数的检查 取“2.1.1”铜绿假单胞菌10-6级菌悬液、枯草芽孢杆菌10-5级菌悬液、金黄色葡萄球菌10-8级菌悬液各0.1ml，分别用已灭菌的45℃胰酪大豆胨琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿；取2.1.3白色念珠菌10-5级菌悬液、黑曲霉10-6孢子菌悬液各0.1ml，分别用已灭菌的45℃胰酪大豆胨琼脂培养基和已灭菌的45℃沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿，按《中国药典》2015年版规定温度培养一定时间，计数，均应不大于100cfu/ml；实测结果见表1，符合要求。